EFECTO DE LA TOPOGRAF´IA DE SUPERFICIES MICROESTRUCTURADAS SOBRE LA ADHESI´ON Y LA MORFOLOG´IA DE FIBROBLASTOS

ALUSTIZA, FABRISIO; BOSCH, PABLO; BARBERO, CESAR; ACEVEDO, DIEGO; YSLAS, EDITH INÉS

Córdoba

Congreso; III Reunión NANO-CORDOBA; 2014

Introducci´on: En los ´ultimos a?nos la superficie microestructurada ha ido ganado cada vez m´as protagonismo en la medicina, la biolog´ıa celular, y otros campos biol´ogicos. En particular, se ha demostrado que los patrones sobre sustratos s´olidos pueden ser utilizados no s´olo para controlar la adhesi´on y crecimiento celular, sino tambi´en para regular las funciones celulares. Objetivos: Fabricar superficies microestructuradas de poliimida (PI) con diferentes per´ıodos (patrones de l´ıneas separados por 1, 2, 5 y 10 μm) utilizando el m´etodo de estructuraci´on directa mediante interferencia laser (DLIP). Estas superficies fueron utilizadas como soporte para el cultivo de fibroblastos, la caracterizaci´on de la adhesi´on, la morfolog´ıa y el patr´on de crecimiento de dichas c´elulas sobre las superficies de PI microestructuradas y no estructuradas (control). Materiales y M´etodos: En este trabajo se describe una microestructuraci´on asistida por la t´ecnica DLIP para producir se?nales topogr´aficas y su uso como soporte celular. Se utilizaron fibroblastos fetales bovinos (FFB) transg´enicos que expresan de manera constitutiva una prote´ına verde fluorescente (GFP) para su observaci´on por microscopia de fluorescencia a diferentes tiempos luego de la siembra. Las c´elulas fueron cultivadas en medio DMEM con 10% de suero fetal bovino a 39 C en una atm´osfera de 5% de CO2 y 95% de humedad. Resultados: Las estructuras resultantes presentaron una forma de distancias peri´odicas bien definida incluso para patrones lineales tan peque?nos como de 1 μm. Posteriormente se evalu´o el crecimiento de los FFB sobre dichas superficies. Se observ´o la respuesta de orientaci´on de contacto de los filopodios de las c´elulas cultivadas sobre las superficies microestructuradas a partir de 4 h de incubaci´on. Las mismas mostraron una morfolog´ıa alargada y orientadas seg´un su eje mayor paralelo a las l´ıneas de estructura para los tama?nos 1, 2 y 5 μm de separaci´on, siendo las c´elulas adheridas a las superficies con patrones lineales de 2 μm de separaci´on las que presentaron patrones de alineaci´on mejor definidos. Contrariamente, las c´elulas adheridas a superficies no estructuradas (control) no presentaron patrones de orientaci´on detectables. De acuerdo a los resultados se puede establecer que las superficies tienen un impacto en el comportamiento de los FFB dependiendo del patr´on topogr´afico de la superficie sobre la que se adhieren y son capaces de preservar se?nales intracelulares espec´ıficas que permiten la supervivencia y proliferaci´on celular. Conclusi´on: El m´etodo DLIP permite producir sustratos microestructurados de forma f´acil, r´apida y econ´omica los cuales son capaces de proveer un soporte apropiado para la adhesi´on y crecimiento celular. Estas caracter´ısticas pueden ser aprovechadas para aplicaciones biol´ogicas y m´edicas incluyendo la ingenier´ıa de tejidos, los implantes, los biosensores basados en c´elulas, microarrays y la biolog´ıa celular b´asica.