Optimización de las condiciones de crecimiento y producción de H2O2 en Lactobacillus crispatus CRL 1266 vaginal con fines probióticos

MARÍA SILVINA JUÁREZ TOMÁS; ELENA BRU; AÍDA P. DE RUIZ HOLGADO; MARÍA ELENA NADER-MACÍAS

Buenos Aires. Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Microbiología; 2001

Asociación Argentina de Microbiología

Los lactobacilos participan en el control de la microflora vaginal e inhibición de patógenos a través de diferentes mecanismos tales como producción de sustancias antagónicas (ácido láctico, bacteriocinas y H2O2), exclusión competitiva o estimulación del sistema inmune. En trabajos previos se seleccionaron cepas de lactobacilos vaginales productoras de H2O2, entre ellas, Lactobacillus crispatus CRL 1266, y se estudiaron sus parámetros de crecimiento en diferentes medios de cultivo e inóculos, a pH 6.5 y a 37°C. En base a los antecedentes descriptos, el objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de pH, temperatura, medio de cultivo y agitación sobre el crecimiento y producción de H2O2 de L. crispatus CRL 1266. L. crispatus, conservado a –20°C, se subcultivó tres veces y se inoculó al 2% en MRS y LAPTg caldos. El crecimiento se determinó por recuento de unidades formadoras de colonias (UFC/ml), densidad óptica (D.O.) a 540 nm y medición de pH. El H2O2 producida durante el crecimiento de L. crispatus fue determinada espectrofométricamente por el método de la o-dianisidina modificado. Los experimentos fueron realizados siguiendo un diseño factorial fraccionario en bloques, en el cual los factores analizados fueron: pH (5, 6.5 y 8), temperatura de incubación (30, 37 y 44°C), medio de cultivo (MRS y LAPTg), agitación (presente o no). El crecimiento óptimo de L. crispatus (mayores D.O. y UFC/ml finales) se observó en los puntos centrales del diseño experimental: cultivos sin agitación tanto en MRS como en LAPTg, a 37ºC y pH inicial de 6.5. Sin embargo, la producción de H2O2 sólo se evidenció en cultivos con agitación, siendo máxima a 37ºC y pH de 6.5, y ligeramente mayor en MRS (4.4  mmol L-1) que en LAPTg (3.4 mmol L-1). En las condiciones anteriores se alcanza una menor biomasa con disminución de las células viables a partir de las 6hs de incubación, en concordancia con el aumento en la producción de H2O2. A 30ºC el crecimiento fue mínimo, al igual que los niveles de H2O2, independientemente del pH inicial y de la agitación. A 44ºC, L. crispatus creció sólo en cultivos sin agitación, aunque en estas condiciones la cantidad de UFC/ml disminuyó una unidad logarítmica entre las 9 y 24 hs de incubación. Los resultados obtenidos permitieron conocer cuáles son las condiciones óptimas de crecimiento, producción de H2O2, e inhibición producida por este metabolito para su aplicación posterior en el diseño de un producto probiótico de aplicación vaginal.