Conservación de lactobacilos vaginales productores de H2O2 por liofilización. Efecto de diferentes crioprotectores

MARÍA SILVINA JUÁREZ TOMÁS; ELENA BRU; GLADIS MARTOS; MARÍA ELENA NADER-MACÍAS

Gral. San Martín. Buenos Aires. Argentina.

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Asociación Latinoamericana de Microbiología. Asociación Argentina de Microbiología

El diseño de productos probióticos de aplicación vaginal requiere que los microorganismos sean viables y conserven sus características benéficas, además de sus propiedades tecnológicas. Entre estas últimas se incluyen un buen rendimiento en la producción de biomasa y estabilidad durante la conservación, para lo que se necesita partir de un cultivo iniciador mantenido de diferentes maneras (congelado, liofilizado, etc). El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de diferentes crioprotectores sobre la resistencia al proceso de liofilización y la conservación en el tiempo de tres cepas de lactobacilos productoras de H2O2, Lactobacillus paracasei CRL 1289, L. acidophilus CRL 1251 y CRL 1266 se sub-cultivaron tres veces en LAPTg caldo a 37°C. El último cultivo se cosechó en fase estacionaria, se lavó con agua destilada estéril, se concentró 10 veces y se resuspendió en las siguientes mezclas protectoras: sacarosa 12%, lactosa 12%, leche 6%, sacarosa12% + leche 6%, y lactosa 12% + leche 6%. Las suspensiones se distribuyeron en ampollas de vidrio (0,30 ml), se congelaron a -70°C y se liofilizaron. Las ampollas con los microorganismos liofilizados (selladas por calor y al vacío) se conservaron a 7°C. Se determinó viabilidad y producción de H2O2 antes y después del proceso de liofilización, y en períodos de 6 meses, durante 2 años. La viabilidad antes y después del proceso de liofilización se analizó estadísticamente con el test de Scheffé. La viabilidad de los tres microorganismos disminuyó durante el proceso de liofilización, según el crioprotector empleado. Sólo en L. paracasei CRL 1289 en leche + lactosa, y en L. acidophilus CRL 1266 en leche + sacarosa las diferencias entre los recuentos pre y post-liofilización no fueron significativas (0,35 y 0,54 U log, respectivamente). En general, la mayor pérdida de viabilidad durante los 24 meses de conservación de los microorganismos liofilizados se observó en leche descremada o en los azúcares individuales. En L. acidophilus CRL 1251 la mayor sobrevida se obtuvo en lactosa sola o combinada con leche, condiciones en las que se recuperaron 106 (UFC/ml), habiendo partido de 108 UFC/ml después del proceso de liofilización. En L. acidophilus CRL 1266 el mayor porcentaje de recuperación (12%) a los 24 meses de almacenamiento se obtuvo en sacarosa. L. paracasei CRL 1289 fue bastante sensible al proceso de liofilización, y la mayor sobrevida (aproximadamente 107 UFC/ml) se observó en leche + sacarosa (3,7%) y leche + lactosa (0,3%). Los resultados obtenidos indican que en la mayoría de los lactobacilos estudiados la presencia de un azúcar (lactosa o sacarosa) individualmente o combinado con leche fue necesaria para obtener una mayor viabilidad en el tiempo. La propiedad de producir H202 se conservó en todos los casos. Las condiciones óptimas de conservación fue característica para cada microorganismo.