Localización de secuencias de copia única mediante hibridación in situ y fluorescencia (FISH) en ovocitos de pollo y su uso en la construcción de mapas citogenéticos de alta resolución

PIGOZZI MI

Pergamino, Buenos Aires

Congreso; XXXVI Congreso Argentino de Genética; 2007

Sociedad Argentina de Genética

En el presente trabajo se utilizaron microextendidos de CS de ovocitos de pollo con el fin de investigar su utilidad como sustrato para la hibridación in situ fluorescente (FISH) en combinación con inmunodetección, y como principio para construir mapas citogenéticos de alta resolución en combinación con datos de frecuencias de crossing over. Se utilizaron sondas que reconocen dos secuencias de copia única en el genoma del pollo fabricadas a partir de ADN de BACs de una biblioteca genómica de la especie. El procedimiento de FISH produjo señales consistentes para ambas secuencias blanco, las cuales mapean en el brazo corto del cromosoma 1. Las frecuencias de crossing over a lo largo del bivalente 1 en ovocitos de pollo habían sido obtenidas previamente en nuestro laboratorio mediante el análisis de focos de la proteína MLH1. La combinación de estos resultados y los que se presentan aquí fueron utilizados para calcular las distancias en cM desde el extremo del bivalente a las secuencias blanco, comparándolas con las distancias del mapa de ligamiento consenso para el cromosoma 1 de Gallus domesticus. La combinación de SC-FISH e inmunodetección permite realizar el mapeo de alta resolución de copias de secuencia única y, en combinación con mapas de recombinación basados en datos de MLH1, constituye un método confiable para obtener distancias genéticas entre marcadores que pueden utilizarse para corroborar las distancias obtenidas mediante análisis moleculares de ligamiento.