La CaMKII activa al intercambiador Na+/H+ y contribuye a la recuperación pHi de una carga ácida en miocitos aislados de rata

VILA PETROFF, MARTÍN G; CECILIA MUNDIÑA-WEILENMANN; HUERGO MARIA ANA; MATTIAZZI, ALICIA

Mar del Plata Argentina

Congreso; LV Reunión de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2007

Sociedad Argentina de Fisiología.

La activación del intercambiador Na+/H+ (NHE) tiene un papel fundamental en la recuperación del pHi durante una carga acida y ha sido atribuida a las interacciones de H+ y MAPK con los sitios alostericos y regulatorios, respectivamente. La recuperación mecánica que ocurre espontáneamente durante la acidosis ha sido vinculada con la activación de la quinasa II dependiente de Ca2+ y calmodulina (CaMKII). Sin embargo, el impacto de esta quinasa sobre la actividad del NHE y la recuperación del pHi no ha sido establecido. En este estudio pusimos a prueba la hipótesis que la CaMKII activa al NHE y contribuye a la recuperación del pHi luego de una carga ácida. Con este propósito, sometimos a cardiomiocitos de rata cargados con el indicador fluorescente de pHi, SNARF-1/AM, a una acidosis intracelular generada por distintos métodos: 1) un pulso de ClNH4 y su posterior lavado (W0) (n=6) 2) la sustitución de una solución amortiguada con HEPES por una solución amortiguada con CO3HNa y equilibrada con 5% CO2-95 % O2 (BIC), al mismo pHo de 7.4 (n=5) y 3) hipercapnia a pHo constante, inducida por sustitución de la solución de perfusión BIC, por otra similar pero equilibrada con 20% CO2-80% O2 y con mayor [CO3HNa] para mantener el pHo en 7.4 (N=4), realizado en presencia de SITS, para inhibir al cotransporte Na+/CO3H-, también alcalinizante. La velocidad de recuperación del pHi (dpHi/dt (min-1)), utilizada como indicador de la actividad del NHE, se midió en ausencia (control) y presencia de 1 µM del inhibidor de la CaMKII, KN93, y fue para 1) 0.17 ± 0.03 y 0.06 ± 0.01*; para 2) 0.09 ± 0.02.y 0.03 ± 0.02*; y para 3) 0.12 ± 0.03 y 0.03 ± 0.02*. Resultados similares se obtuvieron usando 2.5 µM de AIP, un inhibidor mas especifico de la CaMKII. Estos resultados demuestran claramente que la CaMKII, regula la actividad del NHE y contribuye a la recuperación del pHi durante una carga ácida. Este mecanismo podría participar en la recuperación mecánica espontanea que se presenta en la acidosis. *=sig vs. control.