IPE   20454
INSTITUTO DE PATOLOGIA EXPERIMENTAL DR. MIGUEL ÁNGEL BASOMBRÍO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Hidroxitirosol y oleuropeína: actividad y mecanismo de acción contra Leishmania en un modelo de infección in vitro
Autor/es:
MANGHERA, PAULA; PEÑALVA, PABLO; BUTTAZZONI, VALERIA; PENISSI, ALICIA; GARCÍA BUSTOS, MARÍA FERNANDA; PASTRANA, OSCAR
Lugar:
Salta
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas de Investigación, Innovación y Desarrollo; 2019
Institución organizadora:
Consejo de Investigaciones de la Universidad Católica de Salta
Resumen:
Introducción. Los caninos son muy susceptibles a la infección por Leishmania. La enfermedad se caracteriza por la presencia de signos tales como linfadenopatía, dermatitis, onicogrifosis, anemia, pérdida de peso, patologías oculares, hepatoesplenomegalia, diarrea y disfunción renal, lo cual puede conducir a la falla multiorgánica y a la muerte (1). En relación al tratamiento, ninguno de los fármacos utilizados hasta el momento puede garantizar la cura parasitológica a pesar de la mejoría clínica, y casi todos los regímenes terapéuticos tienen una alta tasa de recaída (2-5). Además, los fármacos comúnmente utilizados para el tratamiento de humanos no se recomiendan o están prohibidos para uso veterinario de acuerdo con las directrices de salud pública (6), dejando así escasas alternativas terapéuticas. El olivo, Olea europea L., pertenece a la familia botánica Oleaceae. Los compuestos fenólicos predominantes en el aceite de oliva virgen son tirosol e hidroxitirosol (HXT), seguidos de ácido caféico y oleuropeína (OLP) (7). Recientemente, ha sido descripto el efecto leishmanicida de estos compuestos in vitro sobre distintas especies de Leishmania, con un bajo perfil tóxico sobre la célula huésped (8, 9). Por todo lo expuesto, el primer objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro la actividad de OLP contra Leishmania. Material y métodos. Compuestos: oleuropeína (Sigma). Como controles positivos de inhibición, se utilizaron pentamidina isetionato (Sigma) y anfotericina b deoxicolato (Richet). Parásitos: Se utilizó una cepa de L. (L.) amazonensis (MHOM/VE/84/MEL). Evaluación de la actividad in vitro contra Leishmania: Se cultivaron 1.106 promastigotes en placas de 96 pocillos durante 48 hs. a 23 °C, y en presencia de las diferentes concentraciones de los compuestos a evaluar, por triplicado. Los controles negativos de inhibición fueron parásitos cultivados sin droga. La viabilidad de los promastigotes se determinó por medio del método del MTT. Brevemente, tras la incubación de los parásitos con los compuestos, se añadió a cada pocillo 50 μL de MTT (Bromuro de 3-(4,5dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol) a una concentración de 5 mg/mL. Se incubó durante 4hs., y luego se añadió 100 uL/well de SDS 10% + HCl 0,01 N para disolver los cristales de formazán. Luego de 12 hs., se determinó la cantidad relativa de formazán producido por las células viables, a una absorbancia de 595 nm en espectrofotómetro de placas. El porcentaje (%) de viabilidad celular se calculó con la fórmula: % viabilidad = At - C x 100 / Ac - C, donde At corresponde a la densidad óptica ? DO ? de los parásitos tratados, Ac a la DO de los controles, y C a la DO del blanco. La concentración inhibitoria 50 (CI50) se calculó mediante la conversión del % de viabilidad a su correspondiente valor de CI50 por función de tendencia lineal (GraphPad Prism Software Versión 5.01). Resultados preliminares. En la Tabla 1 se muestran las CI50, en dos experimentos independientes, de OLP, pentamidina, y anfotericina, así como las CI50 promedio. Conclusiones y perspectivas. Oleuropeína podría constituir una alternativa terapéutica para tratar la leishmaniasis canina. Debe ensayarse su efectividad sobre la forma amastigote del parásito; además, deben realizarse pruebas de toxicidad sobre la célula hospedadora (macrófago), y ensayos destinados a dilucidar su mecanismo de acción. Estos experimentos se replicarán luego con hidroxitirosol.