Sistema redox de T.cruzi como factor de virulencia: rol de la triparedoxina peroxidasa (TXNPx) en la patogenia de la enfermedad de Chagas

ZAGO MP; PIÑEYRO MD; MESIAS AC; ROBELLO C; GARG NJ

Mar del Plata

Congreso; X Congreso de protozoología y enfermedades parasitarias; 2014

Sociedad Argentina de Protozoología (SAP)

Nuestro objetivo es estudiar el rol del sistema redox de T.cruzi en la patogenia de la Enfermedad de Chagas. Varios grupos le hemos atribuido un papel único en la virulencia al permitirle enfrentar la primera barrera de defensa impuesta por el sistema inmune innato. Previamente describimos la mayor expresión de proteínas de este sistema, entre ellas, las triparedoxinas peroxidasas (TcTXNPxs), en tripomastigotes de TcI. Para caracterizar su participación sobre la respuesta celular a la infección, se diseñaron mutantes funcionales y sobreexpresantes de TXNPx en la cepa Sylvio X10/cl4 utilizando el sistema pRibotex. Se clonaron la CDS wild type de TXNPx tanto citosólica como mitocondrial y a su vez se produjeron mutaciones sitio-dirigida en dominios cys claves tanto para su actividad redox como resolutiva, a fin de obtener de parásitos recombinantes que sobrexpresen formas activas y no funcionales de estas enzimas y así contar con una batería de clones con distintas capacidad antioxidante. Electroporamos estas construcciones obteniendo transfectantes bajo presión de selección con G418 (250- 400µg). Confirmamos tanto la sobrexpresión por western blot con anticuerpos específicos para ambas TXNPXs(CPX and MPX) como la actividad peroxidasa diferencial de las transfectantes (Peroxidase Assay Kit Invitrogen®) y la sensibilidad diferencial a especies oxidantes (H2O2 y ONOO.- ) con Alamar Blue®. Ensayamos tanto la infectividad de estos transfectantes como la respuesta del huésped tanto in vitro (macrofagos Raw 264) como in vivo (ratones C57BL/6). Hallamos una menor infectividad de las mutantes funcionales negativas de TXNPXs tanto por evaluación directa e indirecta. La determinación de estrés oxidativo global, lipoperoxidación lipídica y actividad mieloperoxidasa demostraron una respuesta diferencial del huésped a la infección, apoyando la hipótesis de que enzimas antioxidantes del parásito podría interaccionar con el huésped para el desarrollo de la patología chagásica.