Modulación del sistema MXR y efectos citotóxicos en intestino medio de trucha arcoíris expuesta in vivo a microcistina-LR

PAINEFILÚ, JULIO C.; FLAVIA BIECZYNSKI; GONZALES, CAROLINA; DE ANNA, JULIETA S; CARLOS M. LUQUET

BsAs

Jornada; XXXVII Jornadas Interdisciplinarias de Toxicología ? I Jornada Virtual Iberoamericana de Toxicología; 2020

Asociación Toxicologíca Argentina

En este trabajo, se evaluaron las alteraciones producidas en el intestino medio de latrucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) por la exposición in vivo a microcistina-LR (MCLR).Los peces recibieron, cada 12 h, alimento balanceado normal (control) o embebido con0,5 µg MCLR g-1 pez (tratado). Luego, fueron sacrificados a las 12, 24, y 48 h paraevaluar, en preparaciones ex vivo de intestino, la función de los transportadores ABCC(estimando la tasa de transporte de un sustrato específico, DNP-SG), la actividad de laenzima proteína fosfatasa 1 (PP1, blanco de esta toxina) y el daño en la membranalisosomal (tiempo de retención de rojo neutro, NRRT50). La exposición in vivo a MCLRcausó una inhibición significativa de la tasa de transporte de DNP-SG a las 12 h de tratamiento (17 %), que se revirtió a lo largo del tiempo, alcanzando un incrementosignificativo a las 48 h (18 %). Para discriminar si este efecto ocurría sobre los ABCCapicales y/o basolaterales, se midió el flujo de DNP-SG en sacos intestinales evertidos yno-evertidos de individuos expuestos por 48 h. Sólo se registró incremento del transportepor ABCC basolaterales (31 %). Estos estudios se complementaron con análisis deexpresión de ARNm de ABCC2 (transportador apical), glutatión S-transferasas omega y pi(GST-ω, GST-π) y del factor de transcripción Nrf2, los que no mostraron cambiossignificativos en la expresión de ninguno de estos genes. Por otro lado, la actividad dePP1 se inhibió significativamente en los peces tratados a todos los tiempos de exposición(13; 25 y 50 %). También se observaron daños significativos en la membrana lisosomal(53; 67 y 42 %, respectivamente). Los resultados indican que MCLR se absorbe en elintestino medio, donde causa efectos tóxicos y cambios en la función de lostransportadores ABCC desde las 12 h post-intoxicación. La inhibición del transporte deDNP-SG causada por la exposición a MCLR concuerda con estudios previos donde seevidencia que esta toxina es transportada por proteínas ABCC, compitiendo con elsustrato indicador. Por otro lado, el aumento en el transporte de DNP-SG en segmentosde intestino no-evertidos indica un incremento de la función de los transportadores ABCCbasolaterales, que compensa parcialmente los efectos de MCLR (se observa unainhibición creciente de PP1, pero el daño a la membrana lisosomal tiende a disminuir a 48h). Estos resultados sugieren que MCLR mantiene al intestino del pez en un permanenteestado de estrés, afectando la regulación de los transportadores ABCC basolaterales yproduciendo efectos tóxicos. Estos efectos podrían disminuir las funciones del intestino ypotenciar los efectos de otros xenobióticos.Agradecimientos: a personal del CEAN, en particular a Pablo Hualde y Pablo Morzenti quienesfacilitaron las instalaciones para los experimentos. Este trabajo fue financiado por CONICET PIP11220130100529CO y ANPCYT-PICT 2018-02653.