TRANSPORTE DE DELTAMETRINA EN TRIATOMA INFESTANS

DULBECCO ANDREA B; MIJAILOVSKY SERGIO J; CALDERÓN FERNÁNDEZ GUSTAVO M; LEYRIA JIMENA; QUINTANILLA MARIA; CANAVOSO LILIAN; JUÁREZ M PATRICIA

POSADAS

Congreso; IX Congreso Argentino de Entomología; 2015

Sociedad Argentina de Entomología

Los insecticidas de contacto son compuestos lipofílicos que ingresan a diversos tejidos blanco luego de penetrar a través de la cutícula. Sinembargo, son muy escasos los estudios sobre los mecanismos de transporte involucrados durante las etapas iniciales de intoxicación.Algunas evidencias sugieren que ciertos insecticidas pueden ser ligados por lipoproteínas. En Triatoma infestans, así como en otros insectos,se ha demostrando la presencia de 3 fracciones lipoproteicas de alta y muy alta densidad (HDLp, VHDL1 y VHDL2 respectivamente) siendola HDLp (lipoforina) la principal responsable del transporte de lípidos. La HDLp está compuesta por dos apolipoproteinas estructurales,apolipoforina I y II, y un núcleo central de lípidos neutros. Funciona como un transportador reusable, trasfiriendo su carga lipídica desde elsitio de absorción o almacenamiento a su sitio de acción, sin ser degradada o internalizada.Estudios previos de este laboratorio demostraron el rol del integumento de T. infestans como barrera a la penetración de deltametrina. Elobjetivo de este trabajo fue avanzar en la comprensión de la vía de transporte del insecticida y el rol del integumento en la interaccióninsecto‐insecticida. Se emplearon insectos adultos de T. infestans para la extracción de hemolinfa, la que fue incubada en presencia dedeltametrina para investigar la afinidad de este piretroide con las lipoproteínas (Lp) hemolinfáticas. Las Lp fueron fraccionadas medianteultracentrifugación en gradiente de densidad de bromuro de sodio. Se determinó la presencia del piretroide en las fracciones colectadasmediante microextracción en fase líquida (LPME) con fibras huecas (HF) y análisis por cromatografía gaseosa con detector de capturaelectrónica (CGC‐EAD). Los insectos fueron obtenidos de una colonia susceptible y una colonia resistente a piretroides. A partir de RNA totalde tejido epidérmico de T. infestans se llevó a cabo la secuenciación de alto rendimiento del transcriptoma en plataforma 454 GS FLX. Con elobjetivo de evaluar la localización de la lipoforina en el tejido integumentario, se realizaron ensayos de inmunofluorescencia directa encriosecciones de tejido obtenidos a partir de las placas esternales de los insectos. Se empleó un anticuerpo anti‐HDLp conjugado conisotiocianato de fluoresceína (FITC) en tanto la identificación de núcleos se realizó con DAPI. El análisis se efectuó mediante microscopíaláser confocalizada (Olympus FV1000). La cuantificación de la deltametrina en las fracciones obtenidas por ulltracentirfugación evidenció quemás del 90% de la deltametrina es ligada por HDLp y VHDL1, siendo HDLp la principal responsable de su transporte. No se observarondiferencias significativas entre insectos susceptibles y resistentes a deltametrina. De las secuencias obtenidas a partir del transcriptoma, sedetectaron numerosos genes relacionados con el metabolismo y transporte de lípidos. Entre estos, dos genes codificantes de receptores delipoforina y tres de apolipoforinas. Los ensayos de inmunofluorescencia demostraron la presencia de lipoforina en la membrana basal yregión sub-epidérmica del integumento. Analizados en conjunto, estos resultados preliminares sugieren que la acumulación del insecticida enun complejo lipoproteico dificultaría su degradación enzimática, favoreciendo el transporte de la molécula intacta hacia los sitios de acción.Además, la presencia de receptores para lipoforina y la detección de esta lipoproteína en la membrana basal del tejido epidérmico sugieren laposible interacción integumento-lipoproteínas con un transporte bidireccional de lípidos y sustancias lipofílicas hacia otros tejidos.