Expresión y purificación del Dominio III consenso del virus del dengue utilizando el sistema baculovirus en células de insectos.

CEREZO, JULIETA; ALEXANDRA TARGOVNIK; MARIA EMILIA SMITH; MARÍA VICTORIA MIRANDA; JULIÁN RODRIGUEZ TALOU

Congreso; ETIF 2016; 2016

El virus del dengue pertenece a la familia Flaviviridae y presentacuatro serotipos antigénicamente diferentes. Es unvirus de RNA simple cadena y su genoma codifica para unapoliproteína que tras su clivado da origen a tres proteínasestructurales cápside (C), membrana (M) y envoltura (E);y a siete proteínas no estructurales. La proteína E poseetres dominios, el dominio III (DomIII) contiene múltiplesepítopes neutralizantes que son serotipo-específicos. Estedominio es más fácil de producir en sistemas recombinantespor su menor tamaño y, además, carece de otrosepitopes que desencadenan anticuerpos no neutralizantesde reactividad cruzada.Recientemente ha sido descripta una secuencia consensodel DomIII, basándose en el DomIII de la proteína E dedistintas variedades de cada serotipo de todo el mundo, lacual demostró capacidad de generar una respuesta inmunecontra todos los serotipos.Las hidrofobinas son proteínas anfifílicas de entre 7.5 ? 10kDa, producidas por hongos filamentosos. Se ha observadoque las proteínas fusionadas a ellas ven alterada su hidrofobicidady pueden ser separadas fácilmente en sistemasde dos fases acuosas (ATPS), principalmente en aquellosbasados en surfactantes no-iónicos.El objetivo de este trabajo es expresar la secuencia consensodel Dom III fusionada a hidrofobina (DomIIIcHFB)utilizando el sistema baculovirus en células de insectosy purificar la proteína mediante un sistema de dos fasesacuosas, con el fin último de desarrollar un kit diagnóstico.