INVESTIGADORES
MIRANDA Maria Victoria
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis biofísico y estructural de la interacción de receptores de células Natural Killer con ligandos virales y del hospedador
Autor/es:
P ROMASANTA; NICOLÀS URTASUN; ALEXANDRA TARGOVNIK; FERNANDEZ LYNCH ; MARIA VICTORIA MIRANDA; FERNANDEZ MARISA; MALCHIODI EMILIO
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Resumen:
Las células NK están reguladas por receptores inhibitorios y activantes que reconocen moléculas CMH-I y análogas no propias en células infectadas o tumorales (Figura 1). En ratones, los receptores NK pertenecen a la familia Ly49 (Figura 2). Ly49H es un receptor activante que al interaccionar con m157, proteína análoga a CMH-I codificada por citomegalovirus murino (CMVM), activa cascadas intracelulares que eliminan la célula infectada. Otra estrategia para la restricción viral es el reconocimiento mediante Ly49P activante de células infectadas que coexpresan el haplotipo H2Dk y la proteína m04 (modifica CMH-I) de CMVM. Objetivos: Estudiar la cinética y termodinámica de interacción de las cuplas Ly49H-m157, Ly49P-H2Dk, mediante resonancia plasmática de superficie (SPR), empleando un biosensor BIAcore. Obtener cristales de Ly49H y Ly49P para la posterior resolución de su estructura mediante difracción de rayos X. Resultados La cupla Ly49H-m157 tiene alta afinidad y cinética lenta, comparada con otras Ly49 interaccionando con CMH-I. Sin embargo, la KD es 10 órdenes de magnitud mayor que la obtenida con la cupla inhibitoria Ly49I-m157 (KD=166 nM). Estos resultados indican que a pesar de que el receptor activante Ly49H reconoce a m157 con una afinidad menor que el inhibitorio Ly49I, esta interacción sería suficiente para activar células NK generando resistencia a la infección por CMVM. La KD de la cupla Ly49P-H2Dk (0.64 ± 0.09 μM) es del mismo orden que la del mutante Ly49PD193G-H2Dk (0.47 ± 0.07μM), indicando que D193 no es un residuo clave para la interacción. No obstante, Ly49P-H2DK posee una cinética más lenta que la mutante, sugiriendo un mayor tiempo de vida media (t1/2) del complejo Ly49P-H2DK, que se debería a la formación de un puente salino entre D193 y L3 de la β2 microglobulina de H2DK. Los cristales obtenidos han sido enviados al National Synchrotron Light Source (Brookhaven, USA) para la colección de datos de difracción de Rayos X a alta resolución.