Caracterización de un modelo de lesión de retina de zebrafish adulto por inyección intraocular de CoCl2.

MEDRANO MP; FAILLACE MP

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). Reunión Científica Anual 2015, Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

SAIC y SAFIS

A diferencia de los mamíferos, los pecesteleósteos regeneran su retina luego de un daño. Para lesionar la retina yestudiar la proliferación y diferenciación celular en la regeneración, se utilizaal zebrafish y la inyección intraocular de toxinas, daños mecánicos o lumínicos.En el zebrafish, la inyección intravítreade ouabaína provoca distintos grados de lesión o se utilizan daños lumínicosextremos para dañar selectivamente los fotorreceptores. En murinos, se observó queuna inyección intravítrea de Cloruro de Cobalto (CoCl2) puedeprovocar serios daños que, en concentraciones adecuadas, induce hipoxia químicaafectando principalmente a los fotorreceptores. Se evaluó la capacidad del CoCl2para inducir muerte selectiva de fotorreceptores en el zebrafish adulto y caracterizar el proceso de regeneración inducidopor este método y compararlo con otras lesiones. Se realizó una inyección únicaintravítrea de CoCl2 a distintas concentraciones y se analizó lamorfología retiniana. Se cuantificó la proliferación celular a 2, 4y 10 días post lesión (dpi), mediante una única inyección de BrdU.  Se analizó la expresión del marcador glial GFAPy se midió por qPCR la expresión de genes marcadores de activación mitótica deprogenitores retinianos (lin28, ascl1a y pax6). La inyección de 10mM de CoCl2eliminó la capa nuclear externa sin afectar mayormente a las otras capasretinianas e indujo una alta proliferación celular. Se describió un picoproliferativo alrededor de los 4 dpi. La expresión de GFAP fue inducida por eldaño y se observó co-localización con glia de Müller BrdU+. La expresión de genesmarcadores de proliferación aumentó significativamente. Una inyección única de 10mM de CoCl2genera una lesión reproducible que daña a la capa nuclear externa, haciendo deesta lesión una herramienta útil para el estudio del proceso de regeneración enzebrafish y como modelo deenfermedades neurodegenerativas en las que se dañan primariamente losfotorreceptores.