Adaptación conformacional del receptor de acetilcolina nicotínico a su entorno lipídico

ANTOLLINI, S.S.; FÉRNANDEZ NIEVAS, G.A.; BARRANTES, F.J.

Bahía Blanca

Jornada; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca

Moléculas altamente hidrofóbicas actuarían como inhibidores no-competitivos del receptor de acetilcolina nicotínico (AChR), ejerciendo su efecto a través de la membrana. Con el objeto de avanzar en la caracterización del mecanismo mediante el cual estas moléculas inhibirían al AChR, estudiamos A) en sistema nativo, si en presencia de estos compuestos hidrofóbicos el AChR sufre cambios conformacionales y B) a nivel molecular, la adaptación del péptido sintético gM4 a sistemas lipídicos definidos, siendo el segmento transmembrana de la subunidad g del AChR con mayor exposición a los lípidos. A- Se utilizó el colorante fluorescente Cristal Violeta (CrV), sonda que se localiza en el poro del canal iónico, en membranas de T. californica. Se obtuvo el valor de KD a partir de curvas de intensidad de CrV en función de su concentración en presencia (AChR desensibilizado, AChRd) y ausencia de carbamilcolina (AChR reposo, AChRr). El KD para el AChRd fue significativamente menor que el obtenido para AChRr. En presencia de hidrocortisona o de ácido linolénico, o en la depleción del colesterol endógeno por tratamiento con b-metilciclodextrina, y siempre en ausencia de agonista, los valores de KD fueron llamativamente menores al del AChRr. B- Se reconstituyó el péptido gM4 en distintos sistemas lipídicos, midiendo en cada caso la posición transmembrana de su único triptofano (Trp) por utilización de fosfolípidos spin-marcados. Se observó que la posición del Trp en el interior de la bicapa es dependiente de su entorno lípidico, es decir, el péptido cambia su ángulo de torsión por adaptación a las características de la bicapa. Estos resultados indican que el AChR sufre una adaptación conformacional a su entorno lipídico inmediato, visualizado a nivel molecular por la flexibilidad demostrada del péptido gM4. Tanto en presencia de compuestos hidrofóbicos exógenos como en ausencia del colesterol endógeno esta adaptación podría explicar la inactivación del AChR.