“Impacto del modo de crecimiento en biofilm en la respuesta inmune innata”

JI FUXMAN BASS; DM RUSSO; ML GABELLONI; JR GEFFNER; A ZORREGUIETA; AS TREVANI

Fundación Instituto Leloir.

Taller; “Taller integrativo sobre biofilms”; 2008

Sociedad Argentina de Microbiología General

Los biofilms juegan un rol relevante en la patogénesis ocasionada por diversas infecciones bacterianas. En dichas patologías, neutrófilos y macrófagos desempeñan roles cruciales para contener y combatir las infecciones. Ciertas evidencias sugieren que los biofilms son capaces de modular la actividad de estas células, no obstante, es aún escaso el conocimiento de la interacción entre los biofilms y el sistema inmune del huésped. Nosotros previamente demostramos que el ADN bacteriano (ADNb) activa a los neutrófilos por una vía que difiere del mecanismo clásico dependiente de motivos CpG y TLR9. Dado que esta vía no requiere la internalización del ADNb, especulamos que el ADNb extracelular  (ADNe) podría ser un agonista relevante en focos infecciosos con bacterias creciendo en biofilms, en los que el ADNe es un componente prominente en su formación y estructura. En este estudio evaluamos el impacto de la eliminación del ADNe de biofilms de P. aeruginosa en la activación de neutrófilos humanos. Incubamos biofilms de 48 hs de formación en presencia o ausencia de DNAsa pancreática (90 U/ml) por 60 min, lavamos y confirmamos su integridad por microscopía confocal (MC). Luego cocultivamos neutrófilos con los biofilms y evaluamos su activación, determinando por ELISA la liberación de IL-8 e IL-1, y mediante MC, la expresión de CD11b y CD18, y la liberación y deposición de mieloperoxidasa (MPO) sobre el biofilm. El tratamiento del biofilm con DNAsa redujo marcadamente la producción de IL-8 y de IL-1 (n=6; p<0,01), así como la expresión de CD18 y de CD11b. La deposición de MPO fue marcadamente superior y colocalizó con el ADNe en biofilms no tratados con DNAsa (coef. solapam.: 0,935). Estos resultados aportan evidencias sobre la importancia del ADNe del biofilm en la activación de neutrófilos, sugiriendo que in vivo el ADNe podría ser un componente muy relevante para inducir la activación de neutrófilos reclutados en focos infecciosos creciendo en modo biofilm.