MECANISMOS TRANSDUCCIONALES INVOLUCRADOS EN LA MODULACIÓN MEDIADA POR GM-CSF DE LA PRODUCCIÓN DE IL-8 INDUCIDA POR ADN BACTERIANO EN NEUTRÓFILOS HUMANOS

FUXMAN BASS, JUAN IGNACIO; ALVAREZ MARÍA EUGENIA; GEFFNER, JORGE RAÚL; VERMEULEN, MÓNICA; GABELLONI, MARÍA LAURA; TREVANI, ANALÍA SILVINA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Inmunología

Previamente demostramos que el ADN bacteriano (ADNb) induce la activación de neutrófilos a través de un mecanismo CpG- y TLR9-independiente, y MyD88-dependiente. También reportamos que el GM-CSF potencia respuestas de neutrófilos CpG-independientes inducidas por ADNb. El objetivo del presente estudio consistió en caracterizar la vías transduccionales involucradas en la potenciación de la producción de IL-8 mediada por el tratamiento de neutrófilos con GM-CSF (15 ng/ml; 30 min) y posterior estimulación con ADN de E. coli (ADNec; 100 µg/ml). Ensayos de Western blot (WB) indicaron que el GM-CSF incrementó marcadamente la fosforilación de las MAPK p38 y ERK1/2 inducida por estimulación con ADNec. La participación de dichas vías fue confirmada porque el pre-tratamiento de neutrófilos con SB203580 (inhibidor de p38) o PD98059 (inhibidor de MEK), redujo el incremento ejercido por el GM-CSF en la producción de IL-8 inducida por ADNec (p<.0,01; n=4), mientras que el pre-tratamiento conjunto con ambos inhibidores la inhibió marcadamente (p<.0,01; n=4). El SP600125 (inhibidor de JNK) incrementó la producción de IL-8 inducida por ADNec en neutrófilos pre-tratados con GM-CSF, sugiriendo que JNK podría modular negativamente la síntesis de IL-8. Mediante ensayos de WB, JNK se encontró fosforilada en neutrófilos estimulados con ADNec y pre-tratados o no con GM-CSF, sin embargo, dicha fosforilación disminuyó a los 60 min post-estimulación con ADNec por efecto del GM-CSF. El GM-CSF también potenció la degradación de IkBa inducida por ADNec evaluada por WB. En acuerdo con esta observación, el inhibidor del proteasoma ALLN redujo la potenciación de la producción de IL-8 ejercida por GM-CSF (p<0,05; n=5). En conclusión, el GM-CSF potencia la producción de IL-8 inducida por el ADNb a través de mecanismo que involucra un incremento en (1) el nivel de activación de mediadores como p38 y ERK1/2 y (2) la translocación de NF-kB al núcleo.