EL ADN BACTERIANO ACTIVA A LOS NEUTRÓFILOS A TRAVÉS DE UNA VÍA INDEPENDIENTE DE MOTIVOS CPG Y TLR9, PERO DEPENDIENTE DE MYD88

ALVAREZ MARÍA EUGENIA; FUXMAN BASS, JUAN IGNACIO; VERMEULEN, MÓNICA; GEFFNER, JORGE RAÚL; TREVANI, ANALÍA SILVINA

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Inmunología

Previamente demostramos que el ADN de E. coli simple cadena (ADNec) induce la activación de neutrófilos a través de un mecanismo CpG-independiente que involucra la activación de las MAPK p38 y ERK1/2 y de los factores de transcripción NF-kB y AP-1. El objetivo del presente estudio consistió en completar la caracterización de los mecanismos transduccionales activados en neutrófilos por ADNec. Ensayos de Western Blot (WB) indicaron que JNK y Akt son fosforiladas a consecuencia de la estimulación de neutrófilos con ADNec (100 µg/ml). El pre-tratamiento de neutrófilos con el inhibidor de JNK SP600125 (10 µM), redujo el incremento en la expresión de CD11b inducido por ADNec (100 µg/ml; n=6; p<0,01) pero potenció la producción de IL-8 inducida por ADNec (100 µg/ml; n=6; p<0,01), sugiriendo que esta vía podría modular negativamente la síntesis de IL-8. Por el contrario, la wortmannina (50 nM), inhibidor de PI3K, no afectó la producción de IL-8 inducida por ADNec (100 µg/ml; n=6), descartando la participación de esta vía en la síntesis de IL-8. Mediante ensayos de kinasa, determinamos que el ADNec induce la actividad kinasa de IRAK1, y mediante WB confirmamos que IRAK1 es fosforilada y degradada a consecuencia de la estimulación de neutrófilos con ADNec (100 µg/ml), sugiriendo que el ADNec induce la activación de neutrófilos activando la vía canónica de los receptores tipo Toll (TLR). Apoyando esta posibilidad, el ADNec no incrementó la expresión de CD11b en neutrófilos de ratones deficientes en MyD88, aunque indujo un incremento significativo en neutrófilos de ratones no deficientes (n=5; p<0,05). El ADNec (100 µg/ml) incrementó la expresión de CD11b en neutrófilos deficientes en TLR9 en niveles similares a los observados en neutrófilos no deficientes. En conjunto nuestros resultados sugieren que el ADN bacteriano estimula a los neutrófilos por una vía CpG- y TLR9-independiente y MyD88-dependiente que podría conducir a activar NF-kB y AP-1.