Apoptosis en el hipocampo de ratas con hipertensión portal pre-hepática.

BUSTAMANTE, J.; LORES ARNAIZ, S.; CZERNICZYNIEC, A.; ARRIAGA, J.; LAGO, N.; LEMBERG, A.; PERAZZO, JC.

Los Cocos

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Neurociencias; 2006

Sociedad Argentina de Neurociencias

La hipertensión portal es una de las principales complicaciones de la cirrosis hepática que frecuentemente conduce a alteraciones en el sistema nervioso central que podrían causar citotoxicidad neuronal. Existen diferentes mecanismos moleculares que conducen a la muerte neuronal, que incluyen vías de señalización intrínsecas y extrínsecas, siendo necesaria la participación de la mitocondria para la realización del proceso apopótico. En este trabajo se evaluó la función mitocondrial, la actividad y expresión de la óxido nítrico sintasa y la inducción de vías de señalización asociadas con el proceso de muerte celular. La hipertensión portal fue generada mediante la ligadura parcial de la vena porta. Catorce días luego de la operación, las ratas fueron sacrificadas. Se extrajo el hipocampo y se realizaron determinaciones de función mitocondrial, mediante determinaciones de consumo de oxígeno en mitocondrias aisladas. Considerando la relevancia del óxido nítrico como regulador de la respiración mitocondrial se determinó asimismo la actividad y expresión de la óxido nítrico sintasa mitocondrial. Los estudios bioquímicos fueron correlacionados con estudios de morfología al microscopio electrónico. Se caracterizó ademeás el proceso de muerte celular vía apoptosis a través de la determinación de la fragmentación del ADN mediante el método de TUNEL utilizando nucleótidos marcados con FITC en cortes de hipocampo de ratas hipertensas y controles y de la expresión de la proteína Bax asociada a la fracción mitocondrial por análisis de Western blot. En las ratas hipertensas portales, la velocidad de respiración se encontró un 29% disminuída en el estado 4 y un 42% en el estado 3 y el control respiratorio disminuyó un 20%, indicando la presencia de mitocondrias disfuncionales. La actividad de la mtNOS se encontró disminuída en 46% en las ratas hipertensas portales, en comparación con las ratas control. Se observó una importante disminución en la expresión de la mtNOS en hipocampo de ratas hipertensas portales mediante ensayos de Western Blot. La disfunción mitocondrial en el hipocampo fue asociada con daños en la ultraestructura de las mitocondrias de astrocitos hipocampales y celúlas endoteliales. Los estudios de TUNEL mostraron focos de intensa fluorescencia asociada a zonas de evidente condensación nuclear. La expresión de la proteína pro-apoptótica Bax se encontró aumentada en las mitocondrias de hipocampo provenientes de ratas hipertensas portales.