Miembros del Complejo de Encefalitis Equina Venezolana ingresan a la célula vía endocitosis dependiente de dinamina e independiente de caveolina.

PIRIS, FRANCO MARTIN; GHIETTO, LUCIA; GIL, PEDRO IGNACIO; DIAZ BRAVO, HERNÁN ; CONTIGIANI MARTA; PAGLINI MARÍA GABRIELA

Cordoba

Congreso; XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología (SAV); 2023

Sociedad Argentina de Virología

El complejo de Encefalitis Equina Venezolana (VEE), perteneciente al género Alphavirus, familia Togaviridae, está formado por seis subtipos antigénicos (I-VI). Son transmitidos por mosquitos y algunos de ellos causan brotes periódicos en América del Sur, en caballos y humanos. Dentro de este grupo se encuentran el virus Pixuna (PIXV) y el virus Rio Negro (RNV), subtipos enzoóticos del complejo. Recientemente se ha reportado un caso clínico de infección por RNV, en la frontera entre Argentina y Bolivia, lo que demuestra la importancia de estudiar estos virus con relevancia médica-veterinaria. En un estudio previo demostramos que ambos virus ingresan, parcialmente, a las células Vero por endocitosis mediada por receptores dependiente de clatrina, no obstante, se han descripto vías alternativas de ingreso en otros alfavirus. A partir de lo mencionado anteriormente, el objetivo del trabajo fue estudiar el rol de las proteínas dinamina-II y caveolina-1 en la entrada del PIXV y del RNV en células Vero. Para llevar a cabo el estudio, monocapas de células Vero fueron transfectadas con plásmidos de expresión para las proteínas caveolina-1 o dinamina-II, acoplados a GFP, correspondientes a las formas (WT), GFP-cav-1-WT y GFP-dyn 1-WT o a las formas dominante negativa (DN), GFP-cav-1-DN y GFP-dyn II-K44A. Posteriormente a ser amplificados y purificados, se corroboró su funcionalidad incubando los cultivos transfectados con Transferrina (Tf–Alexa 647, proteína que ingresa por vía dependiente de dinamina) o con Toxina colérica subunidad-b (ct-b- Alexa 555, proteína que ingresa vía dependiente de caveolina). Se transfectaron cultivos de células vero con los diferentes plásmidos, luego de 24 horas postransfección fueron infectados con PIXV o con RNV (MOI 10). A las 8 horas postinfección (hpi) fueron fijados, procesados para inmunofluorescencia (IFI) y analizados por microscopía para determinar el porcentaje de células transfectadas/infectadas para cada condición y para ambos virus. Se observó una disminución significativa en el porcentaje de infección entre el 60% y el 80% tanto para RNV como PIXV con el plásmido de expresión de dinamina-II. Por otra parte, aquellas células transfectadas con el plásmido de expresión de caveolina-1, no mostraron diferencias significativas entre la forma WT y la DN para ambos virus. Nuestros resultados proporcionan las primeras evidencias de la participación de dinamina-II, pero no de caveolina en el proceso de endocitosis tanto del PIXV como del RNV, para luego continuar con su ciclo replicativo. Consideramos que para buscar vías de prevención y tratamiento de infecciones causadas por los miembros del complejo VEE se necesita un mejor entendimiento de los mecanismos moleculares de su ciclo replicativo y patogénesis y, en este sentido, una estrategia interesante es el bloqueo de los pasos iniciales del ciclo viral.