Participación de cdk5 en el ciclo de replicación del virus Pixuna en células de origen neuronal

NEIRA, MELANIE; GHIETTO, LUCIA; OLMOS, PALOMA; KUNDA, PATRICIA; GIL PEDRO; PAGLINI MARÍA GABRIELA

Virtual

Congreso; XXIV Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba (SBC); 2021

Sociedad de Biología de Córdoba (SBC)

El género Alfavirus es de gran interés epidemiológico ya que sus miembros, incluyendo los virus del complejo de Encefalitis Equina Venezolana (EEV), pueden provocar importantes enfermedades tanto en animales domésticos como en el hombre. En las últimas décadas se ha registrado un aumento en la incidencia mundial de virus transmitidos por artrópodos (Arbovirus). Uno de los intereses de nuestro grupo es el estudio de los mecanismos involucrados en el ciclo de infección de los diferentes miembros del complejo EEV, para ello utilizamos como modelo experimental al virus Pixuna (PIXV), miembro no patógeno de este complejo. En este trabajo se propuso obtener evidencias sobre la participación de la quinasa dependiente de Ciclina 5 (Cdk5), proteína, involucrada en la modulación de la dinámica del citoesqueleto de actina, en el ciclo de replicación del PIXV en cultivo de células derivadas de neuroblastoma de ratón, Neuro 2-a (N2a). En primer lugar, se caracterizó la dinámica de crecimiento del PIXV en cultivos de células N2a. Para ello fue necesario adaptar el PIXV a las células N2a, a través de 10 pasajes ciegos y la visualización del efecto citopático y el último sobrenadante constituyó el stock viral que fue cuantificado por ensayo de placa (EP). Para describir la duración del ciclo de replicación, se infectaron células N2a con MOI 1 y se tomaron sobrenadantes a diferentes tiempos post-infección (2,4, 6, 8, 12 y 24 h) que fueron titulados por EP. Paralelamente, los cultivos fueron procesados para inmunofluorescencia (IFI) y analizados por microscopía. Para caracterizar la participación de Cdk5 en la replicación del PIXV, se inhibió su actividad quinasa mediante Roscovitina (Rosco, inhibidor farmacológico específico de Cdk5). Las células fueron infectadas, tratadas con la droga y a las 8 hpi fueron fijadas y procesadas para IFI. Este trabajo permitió determinar por primera vez que el ciclo de replicación del PIXV en células de origen neuronal es de 12 horas de duración. La inhibición de la actividad de Cdk5 con Rosco provocó la disrupción de los filamentos de actina y una disminución significativa de los títulos virales de alrededor del 30%. En base a los resultados obtenidos podemos sugerir que la quinasa Cdk5 interviene en los procesos de replicación del PIXV. Estos resultados en conjunto y sumado a que las células N2a expresan Cdk5, nos permiten proponer a esta línea celular de origen neuronal como un modelo idóneo para el estudio de la participación de esta proteína en los procesos celulares que involucran la dinámica del citoesqueleto de actina en la replicación viral. La caracterización de los mecanismos moleculares de la infección de los Alfavirus en células neuronales, tiene como principal interés acercarnos más al comportamiento de estos virus en sus células blanco, para entender la patogénesis viral de este género.