Role of cytoskeleton and clatrin in the replication of Pixuna virus

GÓMEZ EMILIANO; GIL PEDRO; KUNDA, PATRICIA; PAGLINI MARÍA GABRIELA

La Falda Cordoba

Jornada; XXI Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba (SBC); 2017

XXI Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba (SBC)

El virus Pixuna (PIXV) es un alfavirus del nuevo mundo perteneciente al complejo de Encefalitis Equina Venezolana. Se sabe que los alfavirus ingresan a la célula por endocitosis mediada por receptores y que el citoesqueleto cumple un rol en la replicación, sin embargo poco se conoce aún acerca de dichos procesos. Por lo tanto, este estudio tuvo como objetivos indagar la participación del citoesqueleto celular en la replicación del PIXV y determinar la necesidad de clatrina en la internalización de los viriones. Para ello, células Vero infectadas fueron tratadas con drogas depolimerizantes y estabilizantes de microtúbulos (MTs) y microfilamentos (MFLs), como así también se sobre-expresaron plásmidos con formas mutadas de clatrina. Posteriormente fueron sometidos a inmunofluorescencia y ensayo de placa. El tratamiento con drogas que afectan la dinámica de MTs disminuyó significativamente los títulos virales extracelulares, en todos los tiempos, mientras que una actina laxa, provocada por el tratamiento con citochalasina D, aumentó los títulos virales extracelulares, en las etapas tempranas del ciclo. Por otra parte, la sobreexpresión de la proteína dominante-negativa de EPS-15, integrante de las fosas recubiertas de clatrina, provocó una disminución significativa de los viriones en comparación con su forma salvaje (WT). Tomados en conjunto, estos resultados indican la dependencia de clatrina junto con un citoesqueleto de actina laxo para la internalización del PIXV a la célula hospedadora. Dilucidar estos aspectos son cruciales para entender la patogénesis viral.