Dependencia de los microtúbulos en la replicación del virus Pixuna

GIL PEDRO; FOZZATTI LAURA; PAGLINI MARÍA GABRIELA

Congreso; XV Jornadas Argentinas de Microbiología; 2014

DEPENDENCIA DE LOS MICROTÚBULOS EN LA REPLICACIÓN DEL VIRUS PIXUNA. Gil, P.I., Fozzatti, L. y Paglini, M.G. Laboratorio de Relación Virus-Célula. Instituto de Virología ?JM Vanella?, Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Córdoba. pedroignaciog@gmail.com En las últimas décadas se ha registrado un resurgimiento a nivel mundial de patógenos virales transmitidos por artrópodos, particularmente por mosquitos. Dentro de los Alfavirus de importancia medico-veterinaria se encuentran los virus pertenecientes al complejo antigénico de Encefalitis Equina Venezolana (EEV). Resultados preliminares de nuestro laboratorio han demostrado que la infección con el virus Pixuna (PXV), representante no patógeno para el hombre del complejo de EEV, afecta de manera crucial la morfología celular, la cual se ve acompañada de severos cambios en la organización del citoesqueleto tanto de microtúbulos como de actina. Se sabe que componentes del citoesqueleto y sus proteínas asociadas son cofactores esenciales para la replicación de algunos virus animales. Con el objeto de indagar sobre la participación de los microtúbulos en la replicación del PXV, utilizamos diferentes drogas que alteran la dinámica de los componentes del citoesqueleto de microtúbulos de las células huésped durante la infección viral. Así, células Vero fueron incubadas durante las diferentes fases de la curva de replicación del PXV (eclipse y exponencial) con drogas que depolimerizan o estabilizan los microtúbulos (Nocodazole y Paclitaxel). Los sobrenadantes de cultivo fueron recolectados a diferentes tiempos y titulados mediante ensayo de placa. Ninguna de las drogas que afectan la dinámica del citoesqueleto fueron capaces de inhibir el ingreso del virus a la célula; sin embargo, el tratamiento durante todo el ciclo de replicación viral y en la fase exponencial, provocó una significativa disminución de los títulos virales extracelulares. Por otra parte observamos una asociación de las proteínas virales con los microtúbulos mediante dos distintas estrategias: a partir de ensayos realizados en monocapas de células Vero transfectadas con un plámido conteniendo tubulina acoplada a la proteína verde fluorescente (tub-GFP) e infectadas con el PXV; y mediante la inmunoprecipitación de tubulina con anticuerpos específicos a partir de homogenatos totales de células infectadas. Así, el conjunto de resultados sugieren que el PXV necesita de un citoesqueleto de microtúbulos intacto para completar su ciclo de replicación y egresar de la célula hospedadora. Dilucidar los mecanismos moleculares de las distintas etapas del ciclo de replicación viral es crucial no solo para entender la patogénesis, sino también para el diseño inteligente de vectores virales seguros para ser usados en investigación, y en terapia génica humana.