Detección molecular del factor de coagulación III (TF). Desarrollo de un método de detección molecular pronóstico en pacientes con carcinoma mamario

OTERO LL; VAZQUEZ V; CASTRO MA; CINAT G; ALONSO DF; GABRI MR; GOMEZ DE

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

SAIC

Las estrategias de detección molecular permiten determinar tempranamente la existencia de enfermedad tumoral con su potencial impacto en el tratamiento. La expresión de factor de coagulación III o Tissue Factor (TF) ha sido reportada en células transformadas y se cree que su expresión está relacionada con el fenotipo metastásico. Se diseñó una estrategia de detección molecular del ARNm de TF para pacientes con carcinoma mediante RT-PCR seguida de PCR anidada, diseñando cebadores interexónicos y contemplando las variantes de splicing de la secuencia. Utilizando la línea MCF7 de cáncer mamario humano, se optimizó la técnica alcanzando niveles de sensibilidad de hasta 5 ng de ARN total en la ronda de PCR y de 500 pg para PCR anidada. Además, se detectó la presencia del marcador partiendo de ARN total en las líneas celulares H125, HeLa (carcinomas humanos de pulmón y cérvix), WERI-RB1 e Y79 (retinoblastomas humanos). TF no fue detectado en material proveniente de la línea SKmel (melanoma humano). Se analizaron 27 muestras de sangre venosa provenientes de 16 pacientes con carcinoma mamario con alto riesgo de recaída. Se interpreta que casos positivos para TF en la etapa de RT-PCR contienen mayor carga inicial de la secuencia por lo que, según los resultados obtenidos, los pacientes se dividieron en 3 grupos: positivos para RT-PCR (Alta carga: 5/16, 31%), positivos sólo para PCR anidada (Baja carga: 8/16, 50%) y negativo para ambos (Carga nula: 3/16, 19%). En los pacientes, la mediana de sobrevida para el grupo de alta carga fue de 16m, mientras que en el grupo de pacientes con carga baja y nula más del 50% de los pacientes se encontraba vivo al momento del cierre de este estudio. En este trabajo, mostramos el desarrollo de un novedoso sistema de diagnóstico molecular basado en la amplificación del ARNm del TF y el análisis preliminar de su utilización como valor pronóstico para carcinoma mamario.