Optimización de métodos de inmovilización de anticuerpos y estrategias de regeneración de un Inmunosensor Electroquímico

YANINA PUERTAS; ROSSANA MADRID

Encuentro; Encuentro Científico de Investigadores de la FACET, ECIFACET 2019; 2019

Facultad de Ciencias Exactas y Tecnología-UNT

Un Biosensor electroquímico de afinidad está basado en lainmovilización de bioreceptores de afinidad, como antígenos o anticuerpos y se caracteriza por no requerir deuna reacción química para que se produzca la interacción analito/bioreceptor. Sufuncionamiento se basa en la capacidad de los elementos de reconocimiento para formar complejos con elanalíto de interés que permiten una gran especificidad. Las respuestas esperadas demandan sistemas de alta sensibilidad y precisión para su detección. El elemento dereconocimiento que se utilizó en el biosensor propuesto como modelo de afinidad sonanticuerpos anti NPTII (aminoglucosido-3? fosfotransferasa) para la detección de proteínasespecíficas expresadas en plantas (las proteínas NPTII). La especificidad y afinidad de lainteracción antígeno anticuerpo determinan la selectividad y la sensibilidad del biosensor.En este proyecto se optimizaron diferentes técnicas de inmovilización de anticuerpossobre electrodos de oro, y se seleccionó la estrategia más adecuada para laregeneración del biosensor.La inmunosensores electroquímicos desarrollados permitieronrealizar inmovilizaciones más reproducibles, estables y económicas de antígenos y/o anticuerpos. Estasuniones al ser muy estables dificultan la re-utilización del inmunosensor, lo que sólo sepuede lograr con una buena estrategia de regeneración. Para lograr esto, es necesario separar elantígeno del anticuerpo luego de la reacción. Esta disociación tiene como requisitocrucial, retener la máxima de actividad y especificidad de los anticuerpos y/o antígenosinmovilizados luego de la separación.En esta tesina se logró inmovilizar adecuadamente losanticuerpos anti NPTII mediante un método de cross-linking empleando polietilenimida y glutaraldehído (PEI ? GA),y bloqueando posteriormente la superficie con solución de bloqueo para evitaruniones no específicas. Se logró luego disociar los antígenos NPTII de los anticuerposinmovilizados, empleando el agente de disociación compuesto por una mezcla de glicina, ácidoclorhídrico y dimetil sulfóxido a pH: 2.3, lo que permitió la regeneración del biosensor.