Generación de células productoras de insulina a partir de células madre embrionarias de ratón

FRANCINI F; MASSA ML; NAUJOK O; JÖRNS A; LENZEN S

Facultad Ciencias Médicas La Plata

Jornada; Jornadas de Medicina 2007 de la Facultad de Ciencias Médicas de la UNLPFra; 2007

Facultad de Ciencias Médicas

Introducción: La generación de células productoras de insulina a partir de celulas madre embrionarias de ratón (CMER) ha sido objeto de numerosos estudios. Sin embargo los resultados obtenidos son controversiales. Objetivo: comparar el efecto de diferentes protocolos de diferenciación sobre la expresión génica y morfología de células madre embrionarias (CME) murinas. Materiales y Métodos: Se diferenciaron CME, según 4 protocolos. La expresión génica se midió por real-time PCR y la morfología mediante microscopía electrónica (ME). Resultados: CME diferenciadas en 1) medio sin suero fetal bovino (SFB) expresan marcadores génicos de diferenciación endocrina. ME: 20% de células son diferenciadas, con elevado grado de apoptosis (30-40%). 2) En medio con 5% SFB en el estadio de diferenciación, la expresión de insulina disminuyó 50%, igual que glucagón y somatostatina. La expresión de Glut-2 (199%), Sur-1 (215%), Kir6.2 (149%), Nestina (319%) y Nkx6.1 (206%) aumentó respecto al protocolo de referencia. ME: se determinó un aumento de células con características endocrinas y elevado grado de diferenciación (40-60%). Los niveles de apoptosis se mantuvieron constantes. 3) La omisión del paso de selección de células nestina positivas, normalizó la expresión de insulina (114%) y aumentó otros genes marcadores (Glut-2 196%, Sur1 148%, Kir6.2 145%), ME: elevado grado de diferenciación celular (40%). 4) En suspensión, la expresión de marcadores endocrinos disminuyó significativamente (Insulina 28%, glucagon no determinable, somatostatina 17%, Glut-2 86%, Sur1 66% Kir6.2 37%, nestina 23% y Nkx6.1 37%). Sólo la expresión de Oct-4 (276%) y Eras (300%) (marcadores de células madre) aumentó. ME: fenotipo embrionario con poca diferenciación (0-5%). Conclusiones: Diferentes condiciones de cultivo afectan la diferenciación de CME a células productoras de insulina. Se estableció un protocolo que induce la expresión de insulina y otros marcadores génicos beta específicos en células con morfología símil a célula beta, y al mismo tiempo reduce la apoptosis. Estas células representan una fuente potencial de insulina para la terapia de reemplazo en diabetes. La generación de células productoras de insulina a partir de celulas madre embrionarias de ratón (CMER) ha sido objeto de numerosos estudios. Sin embargo los resultados obtenidos son controversiales. Objetivo: comparar el efecto de diferentes protocolos de diferenciación sobre la expresión génica y morfología de células madre embrionarias (CME) murinas. Materiales y Métodos: Se diferenciaron CME, según 4 protocolos. La expresión génica se midió por real-time PCR y la morfología mediante microscopía electrónica (ME). Resultados: CME diferenciadas en 1) medio sin suero fetal bovino (SFB) expresan marcadores génicos de diferenciación endocrina. ME: 20% de células son diferenciadas, con elevado grado de apoptosis (30-40%). 2) En medio con 5% SFB en el estadio de diferenciación, la expresión de insulina disminuyó 50%, igual que glucagón y somatostatina. La expresión de Glut-2 (199%), Sur-1 (215%), Kir6.2 (149%), Nestina (319%) y Nkx6.1 (206%) aumentó respecto al protocolo de referencia. ME: se determinó un aumento de células con características endocrinas y elevado grado de diferenciación (40-60%). Los niveles de apoptosis se mantuvieron constantes. 3) La omisión del paso de selección de células nestina positivas, normalizó la expresión de insulina (114%) y aumentó otros genes marcadores (Glut-2 196%, Sur1 148%, Kir6.2 145%), ME: elevado grado de diferenciación celular (40%). 4) En suspensión, la expresión de marcadores endocrinos disminuyó significativamente (Insulina 28%, glucagon no determinable, somatostatina 17%, Glut-2 86%, Sur1 66% Kir6.2 37%, nestina 23% y Nkx6.1 37%). Sólo la expresión de Oct-4 (276%) y Eras (300%) (marcadores de células madre) aumentó. ME: fenotipo embrionario con poca diferenciación (0-5%). Conclusiones: Diferentes condiciones de cultivo afectan la diferenciación de CME a células productoras de insulina. Se estableció un protocolo que induce la expresión de insulina y otros marcadores génicos beta específicos en células con morfología símil a célula beta, y al mismo tiempo reduce la apoptosis. Estas células representan una fuente potencial de insulina para la terapia de reemplazo en diabetes.