Elaboración de una Proteína Fusión (PF): optimización del proceso de cultivo/purificación, estandarización y trazabilidad de la producción a escala de 1 a 10 miligramos.

KIKOT, PAMELA; GRASSELLI, M.

2022-02-01/2022-04-15

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Biológica

Tecnologia sanitaria y curativa-Varios

El Instituto de Química Biológica de la FCEN de la UBA se encuentra desarrollando un servicio de Diagnóstico diferencial para tuberculosis activa y latente. La tuberculosis es una de las principales causas de mortalidad a nivel mundial. Si bien la vacuna BCG confiere protección contra las formas infantiles severas, no protege a adultos, y asimismo se calcula que una cuarta parte de la población mundial tiene tuberculosis latente (LTBI). Diagnos-TB requiere la extracción de una pequeña cantidad de sangre (5ml) de la persona a diagnosticar, que es colocada en tubos de recolección previamente preparados con antígenos de Mycobacterium tuberculosis producidos y purificados in vitro, más otros reactivos de control. La muestra es luego procesada (incubación y centrifugación de laboratorio estándar), y sometida a un ensayo de ELISA, también desarrollado por los investigadores, para la determinación final del diagnóstico, en 24-36hs.Con el objetivo de normalizar la producción de los antígenos, necesarios para producir y comercializar el método de detección, el Instituto de Química Biológica solicitó a nuestro grupo de investigación esta tarea.Objetivo:Producir la denominada ?proteína fusión? a escala de 1 a 10 mg mediante el cultivo en lote de la cepa recombinante E.coli M15 pREP4. Optimizar el proceso de cultivo y purificación. Emitir los procedimientos operativos normalizados ?POE- (método de elaboración, registro de proceso, control de calidad del producto, técnicas analíticas, etc.) necesarios para estandarizar y verificar la trazabilidad del proceso de elaboración y control de calidad del producto proteico puro. Entregar a la contraparte el equivalente a 1 mg de producto junto con el certificado de análisis ?CoA-. Metodología:Se recibió por parte de la contraparte un criotubo conteniendo la cepa productora de la proteína de interés. Se requirió información del clon productor y de las características de la proteína (pI, coeficiente de extinción, peso molecular, etc.). Se emitiró todos los POE y documentaciones anexas necesarios para un proceso estandarizado y trazable. Se elaborará un cepario de trabajo bajo POEs establecidos para su fabricación y registro del control de stock. Se criopreservó.Se realizaron pruebas de cultivo e inducción mediante la adición de IPTG, variando el medio de cultivo y el tiempo de inducción. Se seleccionaron la mejor condición para futuros lotes productivos. Se registró el proceso según POE de método de elaboración en un registro de lote. Se purificó la proteína de interés, se acondicionó según los requerimientos de la contraparte (concentración aproximada 1 mg/ml, pH neutro,