OXIDO NITRICO EN VASOS USADOS PARA BYPAS: ATERIA MAMARIA VS. VENA SAFENA: ROL DE LA TENSIÓN DE ESTIRAMIENTO.

JOO TURONI C,; PERAL DE BRUNO M,; COVIELLO A; MARAÑON R; MUNTANER J,; PROTO V

San Miguel de Tucuman

Congreso; XXIII Congreso Nacional de Cardiología; 2004

Federación Argentina de Cardiología 33 supp 1

Se ha demostrado que la disfunción endotelial seria un mecanismo fundamental en el desarrollo y progresión de las enfermedades cardiovasculares. El óxido nítrico (NO) liberado por la oxido nítrico sintetasa endotelial (eNOS), actúa como un poderoso agente vasodilatador tanto en condiciones basales como estimuladas por diferentes agentes: acetilcolina,  Bradikinina angiotensina II (AngII) a bajas dosis y “shear stress”, sin embargo existirían otras NOS extraendoteliales como la neural (nNOS) y la inducible (iNOS) esta última activada principalmente en la reacción inflamatoria. En el tratamiento quirúrgico de la vasculopatía coronaria(VC) se  usan puentes de  arteria mamaria (AM) y venas safenas (VS). Sin embargo los puentes venosos presentan menor viabilidad a largo plazo ya que desarrollan mas rápidamente remodelamiento que incluirían: hiperplasia de la íntima, ateroesclerosis, cuyos mecanismos fisiopatológicos aun no están dilucidados. Una estimación de la integridad endotelial del puente quirúrgico seria determinar la capacidad de liberación de NO por el endotelio. En trabajos previos demostramos que los niveles de NO dosados en piezas arteriales aisladas de animales variaban de acuerdo a las condiciones previas del vaso, encontrando una mayor liberación en los que estaban sujetos a tensión: T que aquellas que no lo estaban (No tensadas: NT) (Romano y col., 2001). La VS al ser injertada en un lecho arterial estaría sujeta a una mayor presión intravascular que podría modificar  la  liberación de NO.   Objetivos: Estudiar la liberación basal de NO y estimulada por diferentes drogas en VS y AM usadas para revascularización coronaria evaluando el rol de la T en su liberación. Material y métodos: Muestra: 44  pacientes a los que se realizó bypass  (  61,3 ± 1,6 años, 29 varones); derivados al Centro Modelo de Cardiología, luego de un evento isquémico,  para cirugía de bypass programada (04/01 a 01/04). Estos presentaron o no antecedentes de factores de riesgo (FR) asociados: hipertensión arterial (HTA), diabetes (DBT) y/o dislipemia en la historia clínica. Al momento de la operación los pacientes se hallaban controlados en sus cifras tensionales (134,9 ±3,2/ 80,0 ± 1,7 mmHg) como en los valores de glucemia. Restos de porciones de AM y VS  extraídas de cirugía de bypass se transportaron en solución de Krebs refrigerada. Para realizar los experimentos, se obtuvieron (1-4) anillos (5mm) de los vasos. En todos los casos la extracción de las muestras no fue protocolizada para su estudio “in vitro”, de modo que las mismas estaban sometidas a la manipulación quirúrgica habitual (manipulación instrumental, insuflación con solución fisiológica y dilatación a 20 atmósferas y con papaverina). En ningún caso se realizó una maniobra en el tejido para destrucción (mecánica, química)  es decir la VS se encontraría en similares condiciones que en la situación “intraoperatoria”. Se trabajo con dos protocolos una serie a precarga  0 g  (no estiradas o no stretching: NS) y la otra serie a precarga de 3 g,  determinada como optima previamente con Rmax a alto potasio, (estiradas o stretching: S).  En ambos casos se incubó con Krebs normal a 37°C durante 90 min con lavados cada 15 min (Equilibración). La presencia de endotelio (E+) fue determinado por efecto relajante de Acetilcolina 10-6M (Ach) o Bradiquinina 10 –11 – 10-7 M (Bk) sobre una contracción previa a Noradrenalina (NE: 10-6 M ). En el caso de no obtener una vasorelajación a una mayor dosis de Ach (10-5M) se considero sin endotelio (E-). Se midió el contenido de NO por el método de Griess y la reactividad vascular por un equipo de órgano aislado. El NO basal  se midió en S y NS  a los 15 min. En vasos S  se estudio el efecto del tiempo de incubación y el efecto de lavados periódicos durante el periodo de equilibración (curva de tiempo de 90 min con lavados cada 15 min). A fin de determinar liberación basal de NO por actividad  especifica de NOS sobre  L-Arginina se uso el análogo de L-arg:  L-NAME 10-3 M. El NO estimulado en se midió en presencia de Ang II (CDRA 10-9 a 10-6 M) en vasos S y a dosis unicas (10-8 a 10-6 M) en vasos NS. En el primer caso se evaluó a dosis en que se observaba una respuesta contráctil por parte de los anillos de SV. Los resultados se expresaron en pmoles  de Nitritos/mg de tejido como valores promedio ± el error estándar  . Se aplicó la prueba “t”de Student para datos pareados y agrupados y ANOVA con post test de Neuwman Keuls considerándose estadísticamente significativos con un valor p<0,05 . Resultados: De 92 anillos de AM y VS estudiados 8 AM y 14 VS (7 pacientes) presentaron respuesta a vasodilatadores endotelio dependientes. En el caso de las AM los valores fueron AM E+: --595,6± 285,2 mg vs AM E-: +23,372±12,5 mg, p< 0,0001 a Ach 10-6 M. La máxima relajación observada fue de -2166,7 mg. La Bk produjo una relajación similar en AM (Máxima relajación: -2285,7 mg) En VS de 77 anillos, 14 presentaron respuesta a Ach (E+: -134 ± 62 mg vs E-: +90±28 mg, p< 0,0003).Tanto en AM como en VS dosis mayores de Ach o Bk no revertieron el efecto vasoconstrictor en E- ni produjeron una relajación mayor en E+. No encontramos asociación en los pacientes E- con los siguientes FR: HTA, diabetes y/o dislipemia (¡2 =0,234, NS). Los valores de NO a los 15 min de lavado en las AM sometidas a T fueron menores en E- vs E+ (1828,6± 259,0 vs 3698,5± 64,5 pmol/mg de tejido respectivamente n=19 ; p< 0,05). Este mismo efecto de la presencia de endotelio sobre la liberación de NO ocurrió en VS T (E-: 693,8 ± 102,8 pmol/mg de tejido, versus E+:1290,0±215.6, n=18; p< 0,01). Por otra parte las AM sometidas a T que presentaban endotelio demostraron mayor efectividad en la liberación basal de NO (p<0,001) en comparación a las VS. La T demostró ser un factor positivo para la estimulación de la liberación de NO, más aún su efecto se mantiene en AM y VS aún en ausencia de endotelio. Los valores de nitritos en vasos T fueron mayores que en los NT, (p<0,001, ANOVA post test Newman Keuls). La curva de tiempo efectuada en AM sometidas a T mostró un efecto sostenido a lo largo de 90 min del período de equilibración. Sin embargo se observó una diferencia significativa en los primeros 15 min de lavado (p<0.01) en ambos vasos. Las AM sometidas a T presentaron a lo largo de todo la curva de tiempo mayor efectividad (de 2 a 4 veces) para liberar NO en comparación con VS. No hubo diferencias en los valores de NO en anillos cuando no estaban sometidos a tensión (NT) obteniéndose valores similares en AM que en VS. La presencia de E+ no aumento los valores de NO en NT (VS E+: 54,0±21.2, n=11 versus VS E-: 172.1±37.3, n=48, NS). La Ang II a dosis máximas (10-6 M ) en VS mostró diferencias significativas entre T y NT en E+ y E- (VS: delta= 851,6± 241 pmol/mg de tejido N=7 p<0.006 y delta=454 ± 51 pmol/mg de teijdo, n=41 p<0.001 para E+ y E- respectivamente). Sin embargo en vasos T estos valores no fueron estadísticamente diferentes a los obtenidos en la última equilibración. Datos similares se obtuvieron en AM. El L-Name no inhibió ni los valores basales ni los estimulados por Ang II en E- en ningún caso.