Obtención de un modelo animal de sobre-expresión miocárdica de hsp70

MIRANDA S; LORENTI A; BIRNENBAUM S; PRADOS MB

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC-SAI

Obtención de un modelo animal de sobreexpresión miocárdica de HSP70 S. Miranda1-2, A. Lorenti3, S. Birnembaum1, M. B. Prados2, P. Argibay3 y R. Margni2 1-Univ. Arg. J.F.Kennedy, 2- IDEHU (CONICET-UBA), 3- Hosp.Italiano de Bs As. La sobreexpresión de hsp70 en ratones transgénicos ha demostrado proteger el miocardio de injuria isquémica con reducción del área infartada. En trabajos previos demostramos que la IL-6 incrementa la síntesis de hsp70 en cultivos de hibridoma de ratón. Considerando antecedentes del empleo de esta citoquina en pacientes, el objetivo del presente trabajo es establecer un modelo animal de protección miocárdica frente a isquemia experimental por terapia con rIL-6. En primer lugar, analizamos la capacidad inductora de la rIL-6 sobre cultivos de cardiomiocitos aislados. Se emplearon ratas Wistar de 4 a 7 días de vida y se aislaron los miocardiocitos por digestión con colagenasa, cultivándolos posteriormente en DMEM suplementado (4 x 106 células/ml) durante 72 hs en presencia o ausencia de 40 ng/ml de rIL-6. La morfología,  viabilidad y capacidad contráctil de los miocardiocitos en ambos casos fue similar y óptima. Las células fueron cosechadas y sonicadas y los respectivos lisados celulares fueron analizados por western-blot junto a un patrón de HSP70 comercial empleando un mAc. anti HSP70, un sistema amplificador biotinilado y revelado por quimioluminiscencia. La señal fue detectada variando los tiempos de exposición entre 1 y 5 min. Los resultados obtenidos indicaron que la expresión de hsp70 fue notablemente incrementada en presencia de IL-6. La segunda parte del trabajo consistió en ensayar variantes terapéuticas in vivo con el objeto de inducir el aumento de hsp70 en el tejido cardíaco. Empleamos ratones Balb/c de 3 meses de edad (n=32) divididos en 8 lotes: control (inoculados con SF) y lotes A, B y C los que recibieron diferentes dosis de rIL-6: 50 ng (A), 5 ng (B) y 0.5 ng (C). En todos los casos la vía de inoculación fue la ip y el vol inyectado fue 0.5 ml. A su vez, probamos variar el número de dosis por animal: Exp 1: única dosis  y Exp. 2: dos dosis iguales separadas 24 hs entre sí. A las 24 hs de la única (exp. 1) o segunda dosis de rIL-6 (exp 2) se procedió a sacrificar a los animales extrayéndoles sangre para control de laboratorio y aislando los miocardiocitos con el objeto de determinar la expresión de hsp70. Los resultados obtenidos indicaron los miocardiocitos provenientes de ratones inoculados con dos dosis de 50 ng/ml de IL-6 incrementaron la síntesis de hsp70 en un 100%, sin alterarse los parámetros de laboratorio analizados, sugiríéndose como un modelo terapéutico efectivo.