EFECTO INHIBITORIO DE LOS ÁCIDOS GRASOS INSATURADOS DE CADENA LARGA SOBRE LA CAPACIDAD DE VIRULENCIA DE SALMONELLA ENTERICA ACTUANDO COMO LIGANDOS DE SEÑALIZACIÓN DE PHOQ

CARABAJAL, MA; VIARENGO, G.; YIM, L; MARTINEZ-SANGUINÉ, A; MARISCOTTI, J.F.; CHABALGOITY, JOSÉ A.; RASIA, RM; GARCÍA VÉSCOVI, E.

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019), XIV Congreso Argentino de Microbiología General (SAMIGE 2019).; 2019

CAM-AAM-SAMIGE

Introducción y Objetivos: Salmonella enterica es el causal más frecuente de infecciones zoonóticas ytransmitidas por alimentos, causan en la población humana un registro estimado de 20 millones de casossistémicos y 200.000 muertes anuales en el mundo. Nuestro conocimiento acerca del sistema de doscomponentes PhoP/PhoQ de S. enterica, y su relevancia en la capacidad patogénica bacteriana, nos permitióproponer al sistema de transducción de señales PhoP/PhoQ como un blanco clave para la identificación decompuestos con potencial farmacológico, que bloqueen la capacidad infectiva del patógeno. En base a esapropuesta y a partir de una estrategia de rastreo bioguiado de una biblioteca de compuestos de origen vegetal,determinamos que los ácidos grasos insaturados de cadena larga de configuración cis (cis-LCUFAs) constituyenuna señal que modula la actividad del sistema PhoP/PhoQ. Más aún, determinamos que estos compuestosejercen su efecto inhibiendo la actividad autoquinasa del sensor de membrana interna PhoQ y, enconsecuencia, regulan negativamente la expresión de los genes del regulón PhoP. En base a estos resultados,nos planteamos como objetivo determinar el mecanismo de acción por el cual los LCUFAs inhiben la actividadautoquinasa de la histidina-quinasa PhoQ.Materiales y Métodos: Se realizaron medidas de actividad ß-galactosidasa utilizando fusiones del gen lacZ apromotores de genes regulados por PhoP y ensayos de actividad de autofosforilación (actividad autoquinasa) dePhoQ, en presencia de ácido linoleico (cis-LA) y sus isómero geométrico (trans-LA y CLA). Para determinar silos LCUFAs interaccionan especificamente con el dominio sensor de PhoQ, se llevaron a cabo ensayos deThermal Shift y NMR-HSQC con el dominio periplásmico de PhoQ purificado, PhoQp, en presencia de cis-LA ysus isómeros geométricos. Por otro lado, utilizando un modelo murino, previamente tratados conestreptomicina, analizamos el efecto del consumo LCUFAs en el desarrollo de la enterocolitis por S. enterica.Resultados: En este trabajo establecimos que el agregado de trans-LA o CLA al medio de crecimientoprovocan un efecto inhibitorio sobre el regulón PhoP al igual que lo previamente reportado para cis-LA. Además,los resultados obtenidos mediante técnica de Thermal Shift y NMR-HSQC, nos permiten postular que los LCUFAsmodulan conformacionalmente el dominio sensor de PhoQ, y de esta manera inhiben su actividad autoquinasa,afectando negativamente la expresión de los genes PhoP-regulados. Finalmente, los resultados obtenidos en elmodelo en ratones sugieren que los LCUFAs inhiben la expresión de los genes del regulón PhoP durante la etapade infección intestinal.Conclusiones: En suma, estos resultados nos permiten dilucidar el mecanismo de acción de los LCUFAs y surelevancia en el proceso de colonización de Salmonella dentro del hospedador.