Tauroursodesoxicolato previene la colestasis por estradiol 17 β D-glucurónido inhibiendo la activación de las vías de señalización pro-colestásicas PKCc y PI3K/Akt: Mecanismo independiente de fosfatasas

MAIDAGAN P.M.; RAZORI M.V.; CIRIACI N.; CROCENZI F.A.; ROMA M.G.

Rosario

Congreso; Congreso Argentino de Gastroenterologia 2017; 2017

Sociedad Argentina de Gastroenterologia

Introducción: Hemos demostradopreviamente (Hepatology 52:1465-76, 2010) que el E217G, agenteetiológico de la colestasis gravídica, altera la localización y función de los transportadorescanaliculares involucrados en la formación de la bilis, tales como Mrp2 (transportadorde bilirrubina y glutation) y Bsep (transportador de sales biliares),promoviendo la activación por fosforilación de vías de señalizacióndependientes de la proteína quinasa clásica C (PKCc) y de la fosfatidilinositol3 quinasa, (PI3K)/Akt. El ácido ursodesoxicólico (AUDC) es la terapéutica de elecciónpara tratar la colestasis del embarazo; sin embargo, los mecanismos molecularesde acción de este agente farmacológico se desconocen.Objetivos: Evaluar si elmetabolito activo del AUDC, el tauroursodesoxicolato (TUDC), previene la fallasecretora canalicular provocada por el E217G impidiendo laactivación por fosforilación de las vías pro-colestásicas dependientes las quinasasPKCc y PI3K/Akt, y en caso afirmativo, si existen proteínas fosfatasas (PPs) involucradasen su inactivación.Materiales y métodos:Evaluar mediante Western Blot el efecto del TUDC sobre la activación de PKCc (%de enzima translocada a membrana) y de Akt (% de forma fosforilada) inducidapor E217G en hepatocitos de rata. La función secretora de lostransportadores canaliculares fue evaluada invitro en duplas de hepatocitos de rata, cuantificando del % de duplasmostrando acumulación vacuolar canalicular (AVc) del colorante fluorescente colil-glicilaminofluoresceina (CGamF),sustrato de Bsep, y de GSH-S-metilflouresceina (GS-MF), sustrato de Mrp2.Resultados: Cuando lascélulas fueron pre-tratadas con TUDC (50 y 100 µM) yposteriormente expuestas a E217G (200 µM), observamos una prevenciónde la activación de PKCc (-35±5% y -34±4%) y de Akt (-39 ± 3%y -37 ± 2%); p<0.05 vs. E217G.El E217G disminuyó la AVc de CGamF un41 ± 3% (p<0.05 vs. control), mientrasque TUDC (50 y 100 µM) previno parcialmente esta alteración (+61 ± 7% y +72 ± 6%,p<0.05 vs. E217G). Ladisminución en AVc de GS-MF provocadapor E217G fue similar a la de CGamF, y también la prevención porTUDC. Para evaluar la posible participación de PPs como mediadoras del efectopreventivo del TUDC, se cuantificó la AVc de CGamF y GS-MF en presencia de diferentes inhibidores de fosfatasas: Tautomicina(1 nM) y ácido okadaico (5 nM), ambos inhibidores de PP1/PP2A, y tacrolimus (1µM), inhibidor de PP2B. Ninguno de estos inhibidores contrarrestó el efectopreventivo del TUDC sobre la disminución de AVc provocada por E217G.Conclusión: El TUDC preserva la función y localización de lostransportadores Bsep y Mrp2 en colestasis inducida por E217G impidiendola activación de las vías de señalización colestásicas PKCc y PI3K/Akt. Laactivación por TUDC de PPs no sería la causa de dicha inactivación, sino lainhibición de quinasas que actúan cascada arriba de PKCc y PI3K/Aktinvolucradas en su activación