Concentraciones fisiologicas de bilirrubina no conjugada (BNC) previenen la injuria oxidativa hepatocelular

BASIGLIO C.L.; TOLEDO F.D.; ARRIAGA S.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; OCHOA E.J.; MOTTINO A.D.; ROMA M.G.

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS) 2012; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS)

La BNC es considerada actualmente un importante antioxidante endógeno con propiedades citoprotectoras, y diversos estudios destacan su valor potencial en el tratamiento de numerosas patologías pro-oxidantes. El estrés oxidativo (EO) está involucrado en la patogénesis de la mayoría de las enfermedades hepáticas. Nuestro grupo y otros han demostrado que el EO provoca colestasis por internalización endocítica de transportadores canaliculares claves para la secreción biliar (Bsep, Mrp2), vía redistribución de actina. En este trabajo, evaluamos la capacidad de BNC para limitar el EO y las alteraciones en la función secretora biliar inducida por el agente pro-oxidante modelo tert-butilhidroperóxido (tBOOH). Hepatocitos aislados de rata se pretrataron con una concentración fisiológica de BNC (17 µM) y luego con tBOOH (100 µM). BNC previno completamente la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS) inducida por tBOOH, evaluada con la sonda intracelular fluoróforo 2´,7´-diclorofluoresceína (p<0,05; n=4). BNC previno también la lipoperoxidación de membrana inducida por tBOOH, evaluada por la formación de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS), en aprox. un 40% (p<0,05; n=4). Se aislaron hígados de rata y se perfundieron in situ con BNC (2,1 µM; 15 min), y luego con tBOOH (75 μM; 10 min). tBOOH, administrado solo, produjo una caída aguda del flujo biliar (0,75±0,2 vs. 1,5±0,3 μl/min/g híg.), así como un aumento abrupto (250 veces) de la excreción de glutatión oxidado. BNC previno completamente ambas alteraciones (p<0,05; n=5). Asímismo, BNC previno la caída inducida por tBOOH en la excreción de taurocolato, sustrato de Bsep (aprox. 60%, p<0,05; n=4), y de dinitrofenilglutation, sustrato de Mrp2 (aprox. 90%, p<0,05; n=4). En duplas aisladas de hepatocitos de rata, tBOOH (100 µM) disminuyó la capacidad de las duplas para secretar los sustratos fluorescentes de Bsep (colil-lisil-fluoresceína) y de Mrp2 (glutation-metil-fluoresceína). BNC (17 µM) previno esta disfunción en aprox. un 70% (p<0,05; n=4), cualquiera sea el sustrato utilizado. Inmunomarcado de Bsep y Mrp2 seguido de microscopía confocal y análisis de imagen revelaron que tBOOH (125 µM) indujo internalización de estos transportadores, y que el pre-tratamiento con BNC (17 µM) previno significativamente estas alteraciones. Se indagó la capacidad de BNC para prevenir la  desorganización de actina, evaluada mediante la formación de ampollas (?blebs?) de membrana plasmática (por contraste de fase) y por la redistribución de actina marcada con faloidina-Cy3 (por microscopia confocal y análisis de imagen). BNC redujo el aumento de duplas exhibiendo ?blebs? inducido por tBOOH (67,8±1,1 vs. 30,0±1,5 %; p<0.05). Asímismo, BNC previno la redistribución de actina un 50%. Concluimos que BNC previene la disfunción secretora biliar inducida por EO, al prevenir la desorganización de actina y la consecuente internalización de transportadores canaliculares relevantes para la secreción biliar.