Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) participa en la colestasis por estradiol 17ß-glucurónido (E217G): Rol de Aky/PKB y aditividad con proteínas quinasas dependientes de Ca2+ (PKCc).

BOAGLIO A.C.; ZUCCHETTI A.E.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; MOTTINO A.D.; CROCENZI F.A.; ROMA M.G.

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Calibri; mso-font-alt:"Century Gothic"; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-1610611985 1073750139 0 0 159 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin-top:0cm; margin-right:0cm; margin-bottom:10.0pt; margin-left:0cm; line-height:115%; mso-pagination:widow-orphan; font-size:11.0pt; font-family:Calibri; mso-fareast-font-family:Calibri; mso-bidi-font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> E217G induce colestasis aguda y reversible al producir endocitosis de transportadores canaliculares (Bsep y Mrp2), involucrando parcialmente PKCc y PI3K. En este trabajo, indagamos si Akt/PKB, efector cascada abajo de PI3K, está involucrada y si las vías PI3K y PKCc actúan complementariamente entre sí. La función canalicular en DAHR se estudió cuantificando la acumulación apical de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 (CLF y GS-MF) por análisis de imágenes. El inhibidor de Akt/PKB previno la disminución en la secreción de sustratos fluorescentes por E217G. Para establecer la aditividad entre las vías de PI3K y PKCc co-pretratamos las DAHR con Gö6976 (inhibidor de PKCc) y WM. Los inhibidores de PI3K y PKCc previnieron de modo aditivo las alteraciones funcionales de Bsep y Mrp2, estimadas por la acumulación apical de sus sustratos fluorescentes, así como su endocitosis, indicando la existencia de dos mecanismos de acción diferentes, uno probablemente endocitando los transportadores (PKCc) y otro impidiendo su re-inserción (PI3K). Para confirmar esta presunción, y dado que la reinserción pero no la endocitosis es microtúbulo dependiente, evaluamos la participación diferencial de microtúbulos en la prevención provista por PKCc y PI3K. Colchicina (desorganizador de microtúbulos) impidió que WM previniera la disminución de la acumulación canalicular de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 por E217G, mientras que no modificó la capacidad de Gö6976 para prevenir estas alteraciones, un hallazgo confirmado por inmunolocalización de Bsep y Mrp2. En el modelo de hígado aislado y perfundido de rata, Gö6976 previno la disminución inicial del flujo biliar y excreción de glutationy de [3H]-taurocolato inducida por E217G (un proceso que refleja endocitosis de Bsep y Mrp2), mientras que WM aceleró la recuperación de esos parámetros a la normalidad (indicativo de acelerada reinserción de Bsep y Mrp2 por inhibición de la retención de transportadores endocitados mediada por PI3K). Concluimos que la colestasis por E217G involucra cooperativamente las vías de señalización PI3K-Akt/PKB y PKCc, promoviendo internalización de transportadores canaliculares (PKCc) y su posterior retención intracelular (PI3K).