Fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) está involucrada en la alteración secretora biliar ocasionada por estradiol 17ß-glucurónido (E17G) en la rata.

BOAGLIO A.C.; ZUCCHETTI A.E.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; PELLEGRINO J.M.; MOTTINO A.D.; CROCENZI F.A.; ROMA M.G.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XV Congreso Argentino de Hepatología; 2009

Asociacion Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)

&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;lt;!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;amp;gt; Introducción y objetivos: El estradiol 17β-glucurónido (E17G) es un metabolito colestásico endógeno cuyos niveles aumentan varios órdenes de magnitud durante el embarazo. Demostramos que dicho metabolito induce colestasis por internalización endocítica de transportadores canaliculares cruciales para la secreción biliar, tales como el transportador de sales biliares Bsep (Am. J. Physiol 285: G449, 2003) y el transportador de GSH/bilirrubina Mrp2 (Hepatology 35:1409, 2002); esto justificaría la asociación causal de E17G con la colestasis del embarazo. La activación de la vía de señalización mediada por la fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3K) ha sido involucrada en la colestasis por taurolitocolato (JBC 278: 17810, 2003). Puesto que existen patomecanismos comunes entre ambos tipos de colestasis, indagamos aquí si PI3K está involucrada también en los efectos colestásicos de E17G. Resultados: E17G (400 µM) promovió la fosforilación del efector final de PI3K Akt en cultivo primario de hepatocitos a partir de los 20 min, indicando activación de PI3K por E17G. Se analizó la capacidad de los inhibidores de PI3K wortmanina (WM; 100 nM) y LY294002 (50 µM), así como de un inhibidor de Akt (Calbiochem® #124005; 20 µM), para prevenir la alteración secretora ocasionada por E17G en duplas aisladas de hepatocitos de rata (DAHRs), un modelo hepatocelular in vitro con polaridad secretora. Todos los inhibidores previnieron parcialmente la disminución inducida por E17G en la capacidad de las DAHRs para secretar a la vacuola canalicular el sustrato fluorescente de Bsep CLF y el sustrato fluorescente de Mrp2 GS-MF (p < 0.05, - ANOVA/Newman-Keuls). La inmunodetección de Bsep y Mrp2 en DAHRs seguida de microcopia confocal y análisis de imagen reveló que la internalización endocítica de transportadores inducida por E17G fue significativamente prevenida por WM (p < 0.05, - ANOVA/Newman-Keuls). Gö6976 (2 µM), un inhibidor de isoformas ?clásicas? de PKC (cPKC), mostró aditividad con WM, sugiriendo mediación complementaria de las vías PI3K y cPKC en el efecto colestásico de E17G. Para evaluar este fenómeno en un modelo más fisiológico, confirmamos los efectos anticolestásicos de WM en hígados aislados y prefundidos de rata. La inyección intraportal de E17G (2 µmol) indujo una disminución aguda del flujo biliar dentro de los 10 min, no recuperándose durante el resto del período de perfusión (60 min). WM (200 nM) no previno este decaimiento inicial, pero aceleró significativamente la recuperación del flujo biliar a la normalidad. Se observó un comportamiento similar con las excreciones biliares del substrato de Bsep [3H]taurocolato y del substrato de Mrp2 GSH. Conclusiones: La vía de señalización PI3K/Akt modula la falla secretora biliar inducida por E17G, promoviendo la internalización sostenida de transportadores canaliculares claves para la secreción biliar. PI3K/Akt puede ser, por lo tanto, un blanco terapéutico en el fenómeno colestásico asociado a estrógenos.