Rol de las isoformas Ca2+-dependientes de proteína quinasa C (cPKC) en la colestasis inducida por estradiol 17ß-D-glucurónido (E17G) en la rata

CROCENZI F.A.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; RUIZ M.L.; ZUCCHETTI A.E.; ROMA M.G.; MOTTINO A.D.; VORE M.

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

E17G induce colestasis aguda en la rata debido en parte a endocitosis de las bombas exportadoras canaliculares de sales biliares (Bsep) y de otros aniones orgánicos (Mrp2). Dado que se demostró que la activación de cPKC afecta la formación de bilis y la localización de transportadores canaliculares, evaluamos el rol de cPKC en las alteraciones colestásicas inducidas por E17G. Se perfundieron hígados aislados de ratas hembras, adicionándose al perfusato el inhibidor selectivo de cPKC Gö6976 (500 nM). Evaluamos los cambios inducidos por E17G en el flujo biliar, la excreción total de glutatión (GSH) y de 3H-taurocolato (TC). Se recogió bilis antes y después de administrar E17G (2 µmol, intraportal). E17G indujo una disminución rápida (20 min) del flujo biliar (-61%) y de la excreción biliar de GSH (-62%) y de TC (-79%) (p<0.05 vs basal). Gö6976 previno parcialmente la disminución del flujo biliar (-15%), de la excreción de GSH (-23%) y de la excreción de TC (-20%; p <0.05). En otro grupo de animales, se tomaron muestras de hígado a los 20 min de administrado E17G para evaluar la localización de Bsep y Mrp2 por inmunofluorescencia confocal. Este estudio demostró endocitosis de Bsep y Mrp2, la cual fue totalmente prevenida por Gö6976. Para evaluar si E17G indujo activación de cPKC, un cultivo primario de hepatocitos fue expuesto a E17G (50 µM) durante 5-20 min. La activación (translocación a membranas) de una isoforma de cPKC (PKCa) y de una isoforma de PKC Ca2+-independiente (PKCε) se evaluó por western blotting de fracciones citosólica y de membrana total. E17G incrementó un 60% la PKCa unida a membrana a los 5 min (p<0.05), persistiendo por 15 min y retornando a valores basales a los 20 min. E17G no modificó la proporción de PKCε unidad a membrana. Concluimos que E17G activa selectivamente cPKC en minutos, y que estas isoformas cumplen un rol central en esta colestasis por un mecanismo que involucra endocitosis de transportadores canaliculares.