Tauroursodesoxicolato (TUDC) inhibe la activación de las vías de señalización pro-colestásicas PKCc y PI3K/Akt en la colestasis por estradiol 17ß-D-glucurónido (E)

BOAGLIO A.C.; MISZCZUK G.S.; BAROSSO I.R.; TOLEDO F.D.; CROCENZI F.A.; ROMA M.G.

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

E altera la función y localización de Mrp2 y Bsep, transportadores claves para la formación de bilis, activando las vías dependientes de proteínas quinasas C clásica (PKCc) y de fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3K/Akt). La colestasis gravídica, patología asociada a niveles altos de E, es tratada con ursodesoxicolato, cuyo principal metabolito activo es TUDC. Dado que los mecanismos moleculares de acción de TUDC en la colestasis por E no han sido indagados, evaluamos si TUDC puede prevenir esta patología inhibiendo la activación de PKCc y PI3K/Akt. Determinamos por Western Blot, en hepatocitos de rata, la activación de PKCc (% de translocación a membrana) y de Akt (% de forma fosforilada). E activó PKCc y Akt. El pretratamiento con TUDC (50 y 100 µM) seguido de exposición a E (200 µM) previno la activación de PKCc (-35±5% y -34±4%) y de Akt (-39±3% y -37±2%), p<0.05 vs. E. Evaluamos función canalicular en duplas de hepatocitos de rata cuantificando acumulación canalicular (AC) de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 por análisis de imágenes. E (200 µM) disminuyó un 59±2% la AC de cGAMF, sustrato de Bsep (p<0.05 vs. control), mientras que TUDC (50 y 100 µM) previno parcialmente estas alteraciones: +61±7% y +72±6%, p<0.05 vs. E. Las variaciones en la AC de GS-MF, sustrato de Mrp2, fueron similares a las de cGAMF. Las alteraciones por E fueron prevenidas por TUDC en el modelo de hígado aislado y perfundido de rata. E (2 µmol/híg) redujo el flujo biliar (-59±14%, p<0.001). TUDC (50 µM) previno parcialmente la caída del flujo por E (+127±12%, p<0.001), mientras que TUDC 100 µM la previno completamente. Datos similares se obtuvieron al medir velocidad de excreción de TC y DNP-GS, sustratos respectivos de Bsep y Mrp2. La inmunohistoquímica reveló que E indujo endocitosis de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con TUDC previno este fenómeno. Concluimos que TUDC restablece la función y localización de Bsep y Mrp2 alteradas por E, impidiendo la activación de PKCc y PI3K/Akt.