INVESTIGADORES
ROMA Marcelo Gabriel
congresos y reuniones científicas
Título:
Papel de las proteínas quinasas activadas por mitógeno (MAPKs) en la alteración de la función secretora canalicular inducida por tert-butilhidroperóxido (tBOOH) en duplas de hepatocitos de rata (DAHRs)
Autor/es:
TOLEDO F.D.; BASIGLIO C.L.; BOAGLIO A.C.; SÁNCHEZ POZZI E.J.; ROMA M.G.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades del Hígado (AAEEH)
Resumen:
Introducción y Objetivos: El estrés oxidativo (EO) se
presenta como una parte importante de su mecanismo fisiopatológico de muchas
hepatopatías. Estudios previos de nuestro grupo demostraron que el agente
pro-oxidante modelo tBOOH induce alteraciones en la función secretora hepatocanalicular
de DAHRs vía activación de isoformas de
proteína quinasa C dependientes de Ca2+ (Free Rad Biol Med 40:
2005-17, 2006; Toxicol Sci 91: 150-8, 2006). Estas quinasas median la desorganización del
citoesqueleto de actina, la consecuente disrupción de las uniones estrechas
intercelulares y la internalización endocítica de transportadores canaliculares
responsables de la formación de bilis Bsep y Mrp2. Dado que las MAPKs podrían actuar como efectores cascada abajo de cPKC,
en este estudio indagamos la participación de
vías de señalización de las isoformas de MAPKs de tipo ERK, JNK y p38MAPK
en los efectos deletéreos funcionales del tBOOH
en DAHRs.
Resultados: El tBOOH (125µM) disminuyó la
capacidad de las DAHRs para secretar apicalmente el sustrato de Bsep
colil-lisil-fluoresceína (-50±4%, p<0.005). Los inhibidores selectivos de MAPKs
de tipo ERK 1/2 (PD098059, 5mM), de tipo JNK (SP600125, 1µM) y de tipo p38MAPK
(SB203580, 1µM) previnieron
parcialmente esta alteración (PD098059:+28±5; SP600125:+34±5; SB203580:+29±4; n=6, p<0.05). Con el de Mrp2
glutation-metil-fluoresceína, tBOOH (125µM) disminuyó su
excreción apical en DAHRs (-52±4%,
p<0.005), y los inhibidores selectivos de MAPKs previnieron parcialmente
esta alteración (PD098059:+28±3; SP600125:+31±2; SB203580:+31±3, n=5,
p<0.05). Técnicas de inmunomarcado seguido de microscopía confocal revelaron que tBOOH (125µM) indujo marcada
internalización de Bsep y Mrp2, y que
el pretratamiento con los diferentes inhibidores de MAPKs previnieron parcial
pero significativamente estas alteraciones. Por otra parte, la formación de es. El tBOOH (125µM) produjo un aumento de un 50% de protrusiones de membrana plasmática (blebs), un marcador preliminar de la
alteración del citoesqueleto de actina, y los inhibidores de MAPKs previnieron parcialmente
esta alteración (PD098059:+31±3; SP600125:+29±2; SB203580:+25±3, n=3,
p<0.05).
Conclución: Las
MAPKs de tipo p38MAPK, ERK y JNK participan parcialmente en las alteraciones funcionales y
morfológicas inducidas por tBOOH sobre la capacidad de DAHRs
para secretar sales biliares al canalículo biliar, promoviendo la
internalización endocítica de transportadores canaliculares y la desorganización
del citoesqueleto de actina.