Participación de proteínas quinasas activadas por mitógeno (MAPKs) en la falla secretora canalicular inducida por estradiol 17ß-glucurónido (E217G) en duplas de hepatocitos de rata (DAHRs).

BOAGLIO, A.C.; CROCENZI F.A.; ROMA M.G.

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

En estudios previos (Hepatology 48: 1885, 2008), demostramos que el agente colestásico E217G induce alteraciones en la función y localización de los transportadores canaliculares responsablesde la formación de bilis Bsep y Mrp2, vía activación de PKCc. Dado que se ha descripto la existencia de vías dependientes de PKCc que regulan la actividad de MAPKs, indagamos su posible mediación en las alteraciones canaliculares inducidas por E217G en DAHRs.E217G indujo activación de todos los tipos de MAPKs, estimada por un aumento del grado de autofosforilación de las enzimas por Western blotting. La cuantificación de la acumulación apical de sustratos fluorescentes de Bsep y Mrp2 por análisis digital de imágenes reveló que E217G (200  μM) disminuyó la  capacidad de las DAHRs para secretar ápicalmente colil-lisilfluoresceína (CLF; -59,72±1,82%, p<0.005 vs. control) y glutationmetil-glutationmetil-fluoresceína (GS-MF;  -57,73±6,18%, p<0.005 vs. control), sustratos respectivos de Bsep y Mrp2. Los inhibidores selectivos de MAPKs del tipo ERK 1/2 (PD098059, 50 μM), del tipo JNK (SP600125, 10 μM) y del tipo p38MAPK (SB203580, 1 μM) previnieron parcialmente esta alteración (PD098059: CLF: +56,74±7,25%, GS-MF: +51,36±13,7%; SP600125: CLF: +48,60±9,7%, GS-MF:+66,95±3,9%; SB203580: CLF: +43,1±6,6%, GS-MF: +67,67±4,46%; >200 duplas en cada grupo, n=3-4, p<0.05 vs. E217G). Inmunomarcación seguida de microscopía confocal reveló que E217G indujo una extensa internalización de Bsep y Mrp2, y que el pretratamiento con los diferentes inhibidores de MAPKs previno parcial pero significativamente estas alteraciones. Concluimos que las MAPKs participan en la alteración de la función secretora biliar inducida por E217G promoviendo internalización endocítica de transportadores canaliculares.