Efecto anticolestásico del ácido obeticólico en la colestasis por sepsis: Mecanismos transcripcionales y postranscipcionales

RAZORI M.V.; MARTÍN P.L.; BAROSSO I.R.; MEDEOT A.C.; SALAS G.; BASIGLIO C.L.; RUIZ M.L.; ROMA M.G.

Buenos Aires

Congreso; XXII Congreso Argentino de Hepatología; 2023

Sociedad Argentina de Fisiología

IntroducciónLa colestasis asociada a sepsis es debida a la fallasecretora biliar producida por citocinas proinflamatorias cuya liberación espromovida por lipopolisacáridos (LPS) de bacterias Gram (-), las cuales alteranla expresión génica y localización de transportadores hepatocelularesinvolucrados en la formación de bilis. No existe una terapia establecida paraesta patología. El ácido obeticólico (ácido 6alfa-etil-quenodesoxicólico, AOC)es un potente agonista del factor de transcripción receptor X de farnesoides(FXR), el cual regula la expresión de dichos transportadores. El AOC se usa confines terapéuticos en diferentes tipos de colestasis crónicas inflamatorias.Sin embargo, sus efectos anticolestásicos en la falla secretora biliarocasionada por sepsis, una colestasis inflamatoria prototípica, nunca han sidoindagados. Objetivo/sDeterminar los mecanismos anticolestásicos del AOC en unmodelo de colestasis por sepsis producida por administración de LPS, evaluandosu capacidad de compensar transcripcionalmente la caída en la expresión detransportadores hepáticos y normalizar las alteraciones postranscripcionales enla localización de los mismos. Material (pacientes)y métodosRatas Wistar macho se dividieron aleatoriamente en lossiguientes grupos: i) Control (C), ii) AOC (20 mg/Kg/día, i.p., 6 días), iii)LPS (6,5 mg/Kg, i.p., últimos 2 días) y iv) AOC+LPS. Luego, se determinaron losniveles séricos de la fosfatasa alcalina (FAL), un parámetro subrogado de laacumulación hepática de sales biliares (SBs), y la excreción biliar de SBsestimulada por la sal biliar modelo taurocolato (EBTC). Los niveles de ARNm deBsep y Mrp3 (bombas de eflujo apical y sinusoidal de SBs, respectivamente) y deNtcp (transportador basolateral de influjo de SB) se evaluaron por PCR entiempo real y los de proteína por Western blotting. La localización de Bsep yMrp2 se estudió por inmunohistoquímica seguida de microscopía confocal yposterior análisis de imágenes. Se midieron además los niveles de lascitoquinas inflamatorias TNF-alfa e IL-1ß en suero, por ELISA. Resultados yconclusiones(*p<0,05vs. control; #p<0,05 vs. LPS). El AOC normalizó los niveles séricos de FAL(U/L) en las ratas co-tratadas con LPS (C: 170 ± 8, LPS: 338 ± 72*; AOC+LPS:193 ± 18#) y mejoró la EBTC (nmol/min/g de hígado) (C: 1525 ± 128; LPS: 614 ±44*, AOC+LPS: 1205 ± 99#). Esta mejora en la excreción de SBs se asoció a unaumento de la cantidad de Bsep localizada en membrana apical (% de C; LPS: 52 ±9%*, AOC+LPS: 105 ± 12%#), un hallazgo confirmado por análisis de imágenesconfocales (p<0,001), las cuales revelaron una disminuida internalizaciónendocítica de Bsep, asociada a una mejorada localización en membrana. LPSdisminuyó los niveles de ARNm de Bsep (-60 ± 8%*), y el AOC aumentó los mismos(+50 ± 9%#) en las ratas co-tratadas con LPS, sin afectar significativamente ladisminución inducida por LPS en la expresión transcipcional del transportadorbasolateral de captación de SBs Ntcp (-55 ± 2%*) ni el aumento del transportadorbasolateral de eflujo de SBs Mrp3 (+299 ± 60%*), dos cambios adaptativos encolestasis tendientes a reducir la acumulación intracelular de SBs y derivarlasa orina. Finalmente, el AOC contrarrestó las elevaciones (pg/ml) de TNF-alfa(266 ± 56*# vs. 860 ± 153*) e IL-1ß (13 ± 2# vs. 52 ± 8*).Concluimosque el AOC tiene efectos beneficiosos en la colestasis por sepsis, al aumentarla excreción biliar de sales biliares asociado a un aumento de la expresión desu transportador, Bsep, en membrana apical. Su capacidad para reducir laliberación de citoquinas proinflamatorias podría jugar un papel crucial en losefectos anticolestásicos observados.