La proteína reguladora de la dinámica de actina Cdc42, participa en la biogénesis de la vacuola parasitófora donde reside Coxiella burnetii

AGUILERA, MO; CARMINATI, SA; ROSALES, E; BERÓN, WALTER

Mendoza

Jornada; XX Jornadas de Investigación y II de Postgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2006

Secretaría de Ciencia, Técnica y Postgrado, UN de Cuyo

La fiebre Q es una enfermedad causada por Coxiela burnetii, un patógeno intracelular obligado. Esta bacteria infecta un rango amplio de células hospedadoras en las que forma grandes compartimientos, llamados vacuolas parasitóforas (VP). En trabajos previos encontramos que filamentos de actina no solo se asocian a la VP sino también regularían la formación de dicha vacuola por un mecanismo no caracterizado. GTPasas de la familia Rho tales como Ccd42, Rac y Rho, son conocidos reguladores de la dinámica del citoesqueleto de actina. En base a estos antecedentes nos propusimos estudiar el rol de Ccd42 y Rac1 en la biogénesis de la VP donde reside C. burnetii. Para ello células HeLa previamente infectadas por 16h con C. burnetii, se transfectaron con los siguientes constructor: pEGFP-Cdc42 WT, -Rac1 WT, -Cdc42 N17 y Rac1 N17 (mutantes dominantes negativas), -Cdc42 V12 y Rac1 V14 (mutantes dominantes positivas). Luego de incubar por 48h las células se fijaron y se procesaron para inmunofluorescencia indirecta utilizando un anticuerpo específico para detectar C. burnetii. Las células se analizaron por microscopía confocal. En células que sobreexpresaron EGFP-Cdc42 WT y su mutante V12 se observó una marcada localización de estas proteínas en la membrana de la VP. Sin embargo en células que sobreexpresaron la mutante V12 se observó aumento en el número y tamaño de VP en comparación a células que sobreexpresaron la proteína WT y a células control no transfectadas. Sorprendentemente la mutante N17 mostró un comportamiento similar a la WT. En células que sobreexpresaron EGFP-Rac1 WT, no se observó efecto sobre la formación de la VP y esta proteína se localizó claramente en la membrana plasmática y no sobre la VP. Las mutantes dominante positiva y negativa no mostraron diferencias significativas con al WT. Estos resultados sugieren que de las proteínas Rho estudiadas, Cdc42 sería la involucrada en la regulación de la biogénesis de la VP