La GTPasa Arf6 interviene en la fagocitosis de Coxiella burnetii

CARMINATI. S.A.; AGUILERA, M.O.; ROSALES, E.; BERÓN W.

Mendoza

Jornada; XX Jornadas de Investigación y II de Posgardo de la U. N. de Cuyo; 2006

Secretaría de Ciencia, Técnica y Posgrado, U.N. de Cuyo

Fagocitos profesionales y no profesionales son los encargados de eliminar micrororganismos patógenos por medio del proceso de fagocitosis. Luego de la internalización, los microorganismos quedan secuestrados en vesículas denominadas fagosomas los que sufren un proceso de maduración por interacción con diversos compartimientos de la vía endocítica, que finaliza con la fusión con lisosomas donde los microorganismos son degradados. Arf6 es una GTPasa monomérica que pertenece a la familia Ras. Como toda GTPasa se encuentras en estado activo unida a GTP o en estado inactivo unida a GDP. Esta proteína participa en diferentes procesos de tráfico intracelular, en particular endocitosis y fagocitosis. Se ha determinado que ARF6 regula dinámica del citoesqueleto de actina a través de PIP5 kinasa y proteínas Rac. Coxiella burnetii es una bacteria intracelular obligada que sobrevive y se replica en un compartimiento acídico con características lisosomales denominado vacuola parasitófora (VP). Hemos observado que las VP formadas en células infectadas con C burnetii reclutan actina. Considerando la interacción de la VP con actina y que Arf6 regula fagocitosis y el citoesqueleto de actina nos propusimos estudiar si dicha proteína regula la fagocitosis y el tráfico intracelular de C burnetii. Para ellos células HeLa se transfectaron con plásmidos que expresan Arf6 cepa salvaje (WT) y una mutante dominante negativa (T27N), unidas a la proteína fluorescente verde (EGFP), y luego de 6 h se infectaron con C burnetii. Las células se fijaron y se procesaron para inmunofluorescencia indirecta utilizando un anticuerpo específico para detectar C burnetii. Las células se analizaron por microscopía de fluorescencia y confocal. Observamos que en células transfectadas que sobreexpresan la mutante negativa T27N se inhibió significativamente la internalización de la bacteria en comparación a lo observado en células que sobreexpresaba la proteína WT y en células control transfectadas con pEGFP. Estos resultados sugerirían que Arf6 regula el proceso de fagocitosis de C. burnetii.