CD166: un ligando de galectina-8 que media la actividad pro-angiog¨¦nica de la lectina en c¨¦lulas BAEC.

NUGNES, LORENA G.; CARDENAS DELGADO, VICTOR M.; FERNANDEZ, MARISA; MARTINEZ, CAROLINA; TRONCOSO, MARIA F.; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA; ELOLA, MARIA T.

Mar del Plata, Buenos Aires.

Congreso; LV Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica. Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiologica. XLII Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacolog¡¡¨¬ªa Experimental.; 2010

LV Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica. Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiologica. XLII Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacologia Experimental.

La galectina-8 (Gal-8) se caracteriza por poseer secuencias de amino¨¢cidos consenso y dos dominios de reconocimiento a carbohidratos beta-galact¨®sidos. Demostramos previamente que Gal-8 est¨¢ implicada en procesos fisiol¨®gicos como tubulog¨¦nesis y migraci¨®n de c¨¦lulas endoteliales. Son nuestros objetivos: 1) Identificar ligandos para Gal-8 en c¨¦lulas endoteliales BAEC mediante cromatograf¨ªa de afinidad y espectrometr¨ªa de masa; 2) Validar la interacci¨®n de Gal-8 y sus ligandos mediante inmunoprecipitaci¨®n y surface plasmon resonance (SPR); 3) Estudiar los efectos de los glicanos en la interacci¨®n Gal-8/CD166 y 4) Evaluar a CD166 como probable mediador de los efectos angiog¨¦nicos de Gal-8. A partir de lisados de BAEC y mediante cromatograf¨ªa en AffiGel-Gal-8, digesti¨®n in gel y espectrometr¨ªa de masa, se demostr¨® que CD166 (ALCAM) interact¨²a con Gal-8. Mediante co-inmunoprecipitaci¨®n, se detect¨® la formaci¨®n de complejos CD166-Gal-8. Mediante SPR, se determin¨® una constante de disociaci¨®n aparente (KD) de 2 ¦ÌM que indica la especificidad de la uni¨®n Gal-8-CD166. En SPR tambi¨¦n se analiz¨® la dependencia de glicanos en la interacci¨®n Gal-8/CD166: Gal-8 o Gal-8 pre-incubada con sacarosa rindieron afinidad similar respecto a CD166 inmovilizado mediante an¨¢lisis de afinidad en estado estacionario (1,9 x 10-6 M y 1,1 x 10-6 M, respectivamente). Las KDs aparentes obtenidas por an¨¢lisis cin¨¦tico fueron de 2.1 x 10-6 M y 0.58 x 10-6 M, respectivamente. Por lo contrario, la lactosa y el TDG, az¨²cares espec¨ªficos para esta lectina, inhibieron completamente la uni¨®n de Gal-8 a CD166. En cuanto al rol fisiol¨®gico de CD166, BAEC pre-incubadas con anti-CD166 mostraron una disminuci¨®n significativa (1.5 veces, P<0.05) de la tubulog¨¦nesis inducida por Gal-8. Asimismo, anti-CD166 bloque¨® la actividad migratoria inducida por Gal-8 (8 veces, P<0.05). En conclusi¨®n, CD166 es un ligando de Gal-8 en BAEC que media al menos parte de la respuesta angiog¨¦nica inducida por la lectina.