Caracterización de un sistema de la familia ABC en B. suis capaz de realizar eflujo de múltiples compuestos

MARTÍN, F A; POSADAS, D. M.; DELPINO M V; BALDI P C; CAMPOS E; ZORREGUIETA, A

Pinamar, Pcia de Buenos Aires

Congreso; Segunda Reunión de la Sociedad Argentina de Microbiología General. SAMIGE; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología Genaral SAMIGE

En bacterías patógenas la expulsión o eflujo de compuestos tóxicos como antibióticos, sales biliares o péptidos tóxicos hacia el exterior de la célula suele ser crucial en la interacción con el hospedador. Los sistemas tripartitos, formados por un componente de membrana interna (del tipo ABC o RND), una proteína accesoria que se extiende al periplasma (MFP) y un componente de  membrana externa (OMF) son responsables del transporte de substancias desde el citoplasma hacia el medio extracelular en un único paso concertado. Es muy poco lo que se conoce sobre estos sistemas en el patógeno Brucella suis por lo que el objetivo del presente trabajo fue determinar la función de estos transportadores en B. suis. Por análisis filogenético de los componentes MFP presentes en el genoma publicado (www.tigr.org) de B. suis, identificamos dos loci que codifican posibles sistemas ABC-MFP. Con el objeto de realizar ensayos funcionales heterólogos en la cepa mutante hipersensible a sustancias tóxicas de E. coli (acrAB), ambos loci (BR1350-51 y BRA 0464-0465) fueron amplificados y clonados bajo el promotor inducible araC. A través de ensayos en placa y por análisis de la concentración mínima inhibitoria (CIM), determinamos que uno de los loci, que denominamos eflAeflB fue capaz de conferir resistencia a drogas no relacionadas como ácido nalidíxico, rhodamina 6G, eritromicina, acriflavina y CTAB. La capacidad de transporte de EflA-EflB fue confirmada por la disminución en la acumulación de rhodamina 6G evaluada por fluorescencia. Mas aún, la función de eflujo fue suprimida cuando se generó una mutación adicional en el componente OMF de E. coli (tolC),  demostrando que la translocasa EflA-EflB funciona junto con un componente OMF. Por otro lado, una mutación insercional en eflAeflB de B. suis no afectó el perfil de resistencia a los compuestos ensayados. En conjunto, estos resultados indican que B. suis posee al menos un sistema de la familia ABC/MFP/OMF capaz de realizar eflujo de múltiples drogas y que, como ocurre en diversos patógenos, otros transportadores en B. suis podrían contribuir en la eliminación de las sustancias evaluadas.