- Caracterización de la unión de la proteína eritrocitaria Banda 3 a linfocitos B normales y leucémicos

MORANDE P; GALLETTI J; BORGE M; NANNINI P; BEZARES RF; GAMBERALE R; GIORDANO M

La Falda, Córdoba

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 2008

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:11.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt; font-family:Arial; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-bidi-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Los anticuerpos responsables de la anemia hemolítica autoinmune (AHA) asociada a leucemia linfática crónica (LLC) están dirigidos contra las proteínas eritrocitarias Banda 3 (B3), Rh y glicoforinas. Anteriormente demostramos que las células B leucémicas de pacientes LLC capturan B3 soluble y, luego de ser activadas, pueden inducir la proliferación de linfocitos T autorreactivos. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la unión de B3 a linfocitos B normales y leucémicos. Para ello purificamos B3 a partir de eritrocitos, conjugamos la proteína con biotina y analizamos su unión a células mononucleares de sangre periférica de pacientes LLC y dadores sanos por citometría de flujo. Encontramos que la unión de B3 (10 mg/ml) a las células B es bloqueada por un anticuerpo monoclonal dirigido contra el dominio N-terminal de la proteína (B3N) (% de inhibición > 85%, n= 5, células LLC). Confirmamos que B3N es el dominio de B3 reconocido por los linfocitos B mediante el empleo del fragmento recombinante (unión de B3N biotinilado a células LLC, expresada como media de intensidad de fluorescencia: 3,0±2,1 vs 49,5±11,2; sin B3N vs B3N 10mg/ml; n=18; p<0,01). Para determinar si los linfocitos B pueden reconocer B3 en su estado nativo preparamos dos tipos de vesículas a partir de membrana de eritrocitos: con la orientación o polaridad original (VPO) o con la polaridad invertida (VPI). Encontramos que las VPI biotiniladas se unen significativamente más a las células B que las VPO (p<0,01, n=7 para células LLC y n=4 para linfocitos B normales). Esta unión es bloqueada por un anticuerpo anti-B3N (% de inhibición > 90%, n=4). Resultados preliminares mostraron que las VPI son capaces de inducir respuestas proliferativas en dadores sanos (índice de estimulación mayor a 3, variación de cpm mayor a 1000, en 2 de 6 muestras analizadas). En conclusión demostramos que los linfocitos B, pero no los T ni las células NK, reconocen la porción N-terminal de B3 cuando forma parte de vesículas eritrocitarias, tal como se encuentran normalmente en el plasma. Proponemos que, de esta manera, los linfocitos B leucémicos podrían actuar como células presentadoras de antígenos eritrocitarios, iniciando la respuesta autoinmune en AHA.