Alteración de la actividad del complejo I mitocondrial en la línea celular CaCo-2 con expresión reducida del canal de cloruro CFTR mediante ARN de interferencia.

VALDIVIESO, ANGEL G; SÁNCHEZ, FRANCISCO; TAMINELLI, GUILLERMO L; PAGANO, ELEONORA S; CLAUZURE, MARIÁNGELES; MASSIP COPIZ, MARÍA M; SHULMAN, GUSTAVO; TEIBER, MARÍA L; SANTA COLOMA, TOMÁS A

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesivacausada por mutaciones que producen una reducción enla cantidad de canal de cloruro CFTR en la membrana plasmática.Anteriormente demostramos una reducción en la expresión de lasubunidad MTND4 del Complejo I mitocondrial (CIm) y observamosuna disminución en la actividad de dicho complejo, tanto encélulas provenientes de pacientes FQ como en células Caco-2de carcinoma de colon humano tratadas con inhibidores farmacológicosde la actividad del CFTR (glibenclamida y CFTR(inh)-172). Sin embargo, todos los modelos celulares utilizados tienendiversas dificultades. La más importante es quizás la posibilidadde que los resultados estén afectados por una selección clonalinespecífica. El objetivo de este trabajo fue desarrollar unnuevo modelo utilizando ARN de interferencia (ARNi) en lugarde inhibidores del CFTR para demostrar que la inhibición de laactividad del CIm se debe realmente a la disminución del CFTRy no a efectos secundarios de los inhibidores farmacológicos. Segeneraron cinco líneas celulares Caco-2, transfectadas con cuatroplásmidos diferentes que expresan ARNi y con un plásmido control.Se obtuvieron líneas celulares estables mediante selecciónde la resistencia a puromicina de los plásmidos. La puromicina fueelevada paulatinamente, durante varios pasajes. La reducción dela expresión del CFTR fue verificada por qRT-PCR y por Westernblots. Tres de estas líneas celulares con ARNi mostraron unareducción significativa de la expresión del CFTR con respecto alcontrol. Este nuevo modelo de FQ nos permitirá determinar si ladisminución en la actividad del CIm observada en otros modeloscelulares es dependiente de la actividad del CFTR, descartandoposibles efectos inespecíficos de los inhibidores farmacológicos.Agradecimientos: Subsidios del CONICET (PIP 2009-2011), ANPCYT(PICT-2007, 0628) y UCA. Becas CONICET (AGV y MMMC)y ANPCYT (MC).