Producción de un anticuerpo monoclonal dirigido contra la primera región extracelular del CFTR

VALDIVIESO, ANGEL G; SÁNCHEZ, FRANCISCO; TAMINELLI, GUILLERMO L; PAGANO, ELEONORA S; CLAUZURE, MARIÁNGELES; MASSIP COPIZ, MARÍA M; SHULMAN, GUSTAVO; TEIBER, MARÍA L; SANTA COLOMA, TOMÁS A

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El CFTR es un canal de cloruro regulado por ATP y AMPcíclico. Este canal se localiza en la membrana plasmática y suausencia causa la enfermedad conocida como Fibrosis Quística.Existen varios anticuerpos monoclonales contra el CFTR. Unosreconocen sólo la proteína en su estado nativo y otros en suforma desnaturalizada, lo que restringe su versatilidad. Además,la mayoría son poco específicos y sensibles. Los de mayor títuloy especificidad reconocen únicamente regiones intracelulares delcanal. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un anticuerpomonoclonal dirigido contra la primera región extracelular delCFTR, capaz de reconocer al canal es su forma nativa y desnaturalizada.Este anticuerpo monoclonal nos permitiría en el futurodesarrollar de un aptámero capaz de reconocer la misma regiónextracelular del CFTR. Para obtener el anticuerpo se inyectaron 3ratones BALB/c con un péptido sintético que contenía la secuenciacorrespondiente a la primera región extracelular del CFTR(primer “loop”), aminoácidos 102-117. Fue elegida esta regiónextracelular por su alto índice antigénico, de acuerdo al programaCGC (Genetic Computer Group). El péptido fue acoplado a KLHy luego de cuatro inyecciones se seleccionaron los ratones conmayor título. Los hibridomas se generaron usando la técnica deKöhler y Milstein. Luego se realizó la expansión clonal del hibridomaseleccionado y se extrajo el fluido ascítico. Se determinóla especificidad del anticuerpo producido mediante Western blots,utilizando proteínas de células Caco-2. El anticuerpo resultó altamenteespecífico y sensible en Western blots, pero al igual que elresto de los anticuerpos existentes, reconoce muy débilmente elCFTR en la membrana extracelular. El próximo paso será produciraptámeros contra la misma región del CFTR y evaluar su utilidaden reemplazo de los anticuerpos. Agradecimientos: Subsidios delCONICET (PIP 2009-2011), ANPCYT (PICT-2007, 0628) y UCA.Becas CONICET (AGV y MMMC) y ANPCYT(MC).