Regulación de la expresión del canal de Cl-, CFTR, por altas dosis de Il-1beta, en células CaCo2

PAGANO, ELEONORA S; VALDIVIESO, ANGEL G; TAMINELLI, GUILLERMO L; SANTA COLOMA, TOM¨¢S A

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual; 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La fibrosis quística (FQ) es producida por mutaciones en el genque codifica el canal de cloruro CFTR. El efecto de las citoquinassobre la regulación de la expresión del CFTR es un tema de interésen nuestro laboratorio por su rol en los procesos inflamatoriose inmunológicos, alterados en FQ. La interleuquina-1 beta (IL-1b)resulta elevada en el esputo de pacientes FQ. Las células decarcinoma de colon humano constituyen un buen modelo para elestudio de la regulación del CFTR por IL-1b debido a que expresantanto CFTR como receptores para IL-1b. En un trabajo previo,demostramos que el tratamiento de las células T84 con IL-1b (0.25-0.50 ng/ml) resultó en un incremento en la expresión delCFTR mientras que dosis más altas (=2.5 ng/ml) la inhibieron. Elaumento de CFTR por IL-1b está mediado por la activación delfactor de transcripción NF-kB. El objetivo de este trabajo es estudiarel mecanismo en la fase inhibitoria. Resultados preliminaressugieren una correlación entre la expresión del CFTR y la de Fos/Jun en respuesta a altas dosis de IL-1b. En este trabajo, se estimularoncélulas CaCo2 con distintas concentraciones de IL-1b (0,0.25, 0.5, 0.75, 1, 2.5 y 5 ng/ml) por 4 hs y luego se determinó laexpresión relativa del mARN de CFTR. La misma se incrementóen respuesta a 0,75 ng/ml de IL-1b (1,7 +- 0,38 veces con respectoal control, p<0,5) y disminuyó a niveles similares al control con1 y 2,5 ng/ml de IL-1b. La expresión a nivel de proteína, determinadapor WB utilizando un anticuerpo monoclonal específico, sigueel mismo patrón que el mRNA. Para determinar si esta fasede la curva es vía JUN, se trató las células por 1 hora con elinhibidor específico (SP600125) a distintas concentraciones (0, 5,10 y 20 µM) y, luego de estimular con IL-1b, a baja y alta dosis,se determinó la expresión de CFTR por PCR. Los Resultados obtenidosapoyan la participación de la vía de JNK en la faseinhibitoria de la acción de IL-1b sobre la expresión del CFTR