Visualización de la expresión diferencial de proteínas utilizando bibliotecas de ADN marcadas

ASENSIO, CRISTIAN; MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; CLAUZURE, M.; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; SANTA COLOMA TA

Mar del Plata

Congreso; 59a Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica - SAIC; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La fibrosis quística (FQ) está caracterizada por una condicióninflamatoria general con elevada concentración de citoquinas enesputo, incluyendo interleuquina 1-B (IL-1B). Trabajos previosde este laboratorio demostraron el rol de IL-1B como moduladorextracelular de la expresión de ARNm de CFTR. Esta modulaciónes bifásica: estimuladora a dosis bajas (< 0,7-1,0 ng/ml) e inhibi-toria a dosis altas (>2,5 ng/ml). Por otro lado, en FQ se encontróreducida la expresión de MTND4, una subunidad clave para laactividad de Complejo I mitocondrial (Cm-I). Consecuentemente,se encontró una actividad reducida de Cm-I. En este trabajo sedemostró que hay un aumento en la expresión y secreción deIL-1B en células IB3-1 (FQ) y en células Caco-2/pRS26 (shRNAespecífico para CFTR) respecto de las células controles. Asi-mismo, se demostró que IL-1B (5 ng/ml) reduce la actividad deCm-I y aumenta los niveles de especies reactivas de oxígeno(ROS) en células S9 (células IB3-1, ?FQ rescatadas?) o Caco-2/pRSctrl (shRNA control) a valores comparables a los de IB3-1 oCaco-2/pRS26. La incubación con un anticuerpo bloqueante deIL-1B, con antagonista del receptor de IL-1 o con inhibidores deNF-kB o de p38, restauró la actividad de Cm-I y redujo las ROSmitocondriales y citoplasmáticas en las células IB3-1 o Caco-2/pRS26 a valores normales. Inhibidores de MEK1/2 o de JNK, nomostraron efecto. En conclusión, los resultados sugieren que lasecreción de IL-1B y su señalización autócrina es responsable dela reducción de la actividad Cm-I y del aumento de ROS obser-vados en células con la actividad del CFTR alterada. Resultadossimilares con respecto a la falla mitocondrial del Cm-I han sidoobservados en ratones transgénicos que expresan CFTR mutado.Agradecimientos: Subsidios CONICET (PIP 2012-2014, 0685),ANPCYT (PICT-2012, 1278) y UCA. Becas CONICET (MMMC),ANPCYT (CEC) y UCA (MC).