Mecanismo de regulación del pH extracelular por el canal de cloruro CFTR

CANCIO, CARLA; MORI, CONSUELO; MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; CLAUZURE, M.; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; SANTA COLOMA TA

Mar del Plata

Congreso; 60a Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica - SAIC; 2015

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La Fibrosis Quística (FQ) es causada por mutaciones en elgen CFTR, que codifica un canal de Cl- y HCO3- activado porAMPc. Se ha propuesto que la falla de la función del CFTRcomo transportador de HCO3- induce una disminución del pHextracelular (pHe). Anteriormente, reportamos que la reducciónde la actividad del Complejo I mitocondrial (CIm) en FQ estámediada por un efecto autocrino de interleuquina-1 beta (IL-1β).Esta falla en el CIm podría afectar la producción de lactato porefecto Warburg. Proponemos como hipótesis que el pHe estaríadisminuido por una combinación entre el menor transporte deHCO3- y el aumento en la producción de ácido láctico. Nuestroobjetivo fue demostrar esta hipótesis y estudiar los mecanismosde regulación del pHe mediados por CFTR. Como modelo seutilizaron células Caco-2 (CFTR salvaje) transfectadas con unplásmido de ARN de interferencia contra el CFTR (shRNAi, CacopRS26)y con un plásmido control (Caco-pRS30003). Las célulasCaco-pRS26 mostraron una reducción significativa del pHe conrespecto a las células controles. El tratamiento de las célulasCaco-pRS30003 (CFTR salvaje) con IL-1β exógena produjo unareducción significativa del pHe. El bloqueo de la señalización deIL-1β con el antagonista ILRN1 en células Caco-pRS26 rescatóparcialmente el pHe, lo que sugiere un efecto autocrino de dichacitoquina. Luego se estudiaron diferentes vías de señalizaciónde IL-1β. La inhibición de c-Src (PP2) y de JNK (SP600125),aumentó significativamente el pHe en ambas líneas celulares.El tratamiento con oxamato, un inhibidor de la lactato deshidrogenasa,rescató el pHe en las células Caco-pRS26 comparadascon las células controles. Estos datos sugieren que la producciónde ácido láctico, incrementada por la disminución de la actividaddel CFTR, cumple un rol fundamental en la regulación del pHe.Agradecimientos: CONICET, PIP2012-2014-0685 y PICT2012-1278 de la ANPCYT. Beca Agencia (CEC), beca UCA (MC) ybecas CONICET (CM, MMMC, MC).