CLONADO DEL GEN W02B12.15 DE C. ELEGANS CODIFICANTE DE PROTEINA ORTOLOGA A CISD1 HUMANA

SCHULMAN GUSTAVO; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; CLAUZURE, MARIÁNGELES; MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; SANTA COLOMA TOMAS A.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La proteína mitocondrial CISD1 posee un dominio no antes descripto, altamente conservado de unión a centros 2Fe2S. In vitro, concentraciones fisiológicas de NADPH inhiben la transferencia de centros 2Fe2S desde CISD1 a apoproteínas aceptoras. CISD1 es el segundo blanco farmacológico conocido de la droga antidiabética pioglitazona, y su ARNm se ve disminuido en líneas celulares provenientes de enfermos de fibrosis quística. Dada la escases de estudios sobre el rol fisiológico de CISD1 hemos decido comenzar con ellos en C. elegans, que cuenta con una proteína ortóloga, codificada por el gen W02B12.15. Con ese fin, hemos generado distintos reactivos biológicos para utilizarlos como herramientas. Se clonaron distintas secuencias de W02B12.15 en los correspondientes plásmidos según su futura aplicación. Todos los clonados fueron hechos con productos de PCR amplificados a partir de ADN genómico o cDNA total. Tanto el ADN como el ARN se extrajeron de poblaciones no sincronizadas de C. elegans N2 cultivadas en medio NGM con bacterias E. coli HB101 como alimento. Para expresar la proteína codificada por W02B12.15 en bacterias, con la cual se obtendrán anticuerpos, se clonó la secuencia del ORF correspondiente a la región soluble de la proteína, según homología con CISD1, en el vector prSetA. Para estudiar la expresión tisular y su localización subcelular, se clonaron en el plásmido pPD95-75 de expresión en C. elegans, fusionados al ORF de GFP, el promotor, y éste más el gen completo sin la secuencia 3?UTR. Por último, se clonó en el plásmido de RNAi L4440, el ORF completo de W02B12.15. El objetivo siguiente será estudiar la función de la proteína codificada por el gen W02B12.15. Se analizará si su localización es efectivamente mitocondrial, su posible rol en esta organela y el efecto en la sobrevida del nematodo, entre otros. Agradecimientos: Subsidios del CONICET (PIP 2009-2011), ANPCYT (PICT-2007, 0628) y UCA. Becas CONICET (GS, MC y MMMC) y UCA (AGV).