INVESTIGADORES
SANTA COLOMA Tomas Antonio
congresos y reuniones científicas
Título:
La disminución de la actividad del canal de cloruro CFTR determina una disminución del Ph extracelular en cultivos celulares.
Autor/es:
CANCIO, CARLA; MORI, CONSUELO; CLAUZURE, M.; MASSIP COPIZ MARÍA MACARENA; VALDIVIESO ANGEL GABRIEL; SANTA COLOMA TA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2014
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Medicina Clínica
Resumen:
La Fibrosis Quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva
causada por mutaciones que afectan la actividad del canal
de cloruro CFTR. Además de transportar Cl-, su actividad se ha
visto asociada al transporte de bicarbonato, con implicancias en
la regulación del pH extracelular. Recientemente reportamos una
reducción de la actividad del Complejo I mitocondrial en FQ que
está mediada por IL-1beta. La reducción de la respiración celular
en FQ podría conducir a un aumento en la producción de lactato
que, sumado a la alteración del transporte de bicarbonato, podría
profundizar la reducción del pH extracelular. Nuestro objetivo
es determinar si la falla del CFTR induce una disminución en el
pH extracelular en cultivos celulares y los posibles mecanismos
involucrados. Como modelos de FQ se utilizaron células IB3-1
(FQ) y células C38 (IB3-1 con CFTR corregido); y células Caco-
2 (expresan CFTR) transfectadas con un plásmido de ARN de
interferencia contra el CFTR (shRNAi, Caco-pRS26) y con un
plásmido control (Caco-pRS30003). Se cultivaron 20000 células/
cm2 en medio DMEM/F12 con 5% de suero fetal bovino, se dejaron
crecer 3 días y luego fueron incubadas en medio libre de
suero a diferentes concentraciones de bicarbonato. Los resultados
mostraron una disminución del pH extracelular en células IB3-1
(pH=7,65) respecto a las células C38 (pH=7,94) de 0,29 ± 0,06
puntos (media±SE, n=3) en medio sin HEPES. Resultados similares
fueron obtenidos en células IB3-1 (pH=7,02) y C38 (pH=7,31)
incubadas en medio con HEPES. Estos resultados se repitieron en
células Caco-pRS26 con respecto a las células Caco-pRS30003.
Podemos concluir que efectivamente existe una reducción en el
pH extracelular en cultivos de modelos celulares FQ. Esta disminución
posiblemente esté relacionada con una mayor producción de
lactato y una menor secreción de bicarbonato. Agradecimientos:
CONICET, PIP-2012-2014-0685 y PICT 2012-1278 de la ANPCYT.
Beca Agencia (CEC), beca CONICET (MMMC) y beca UCA (MC).