ESTUDIOS PRELIMINARES SOBRE EL DESARROLLO DE OLIGOBODIES CONTRA LA PROTEINA PRP BOVINA

VALDIVIESO AG; TAMINELLI GL; SANTA COLOMA TA

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica -SAIC- 50 Reunión Científica Anual.; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Los oligobodies (Obs) son reactivos sintéticos basados en oligonucleótidos de cadena simple capaces de reconocer proteínas. Se distinguen de los aptámeros en su estrategia de selección: los Obs están basados en una selección por especificidad y los aptámeros por alta afinidad. Pueden ser amplificados por PCR, lo cual aumenta los limites de detección a los niveles detección por PCR, algo imposible de obtener con anticuerpos. El objetivo de éste trabajo fue desarrollar Obs contra péptidos sintéticos de diferentes regiones de PrP bovina (PrPC) y probarlos en su habilidad para reconocer PrPC y PrP recombinante (rPrP). No se trabajó con priones. Para seleccionar los Obs, se construyeron diferentes librerías de oligonucleótidos de secuencia al azar (entre 55 y 75 mer). Las selecciones iniciales se realizaron incubando membranas saturadas con los péptidos sintéticos y utilizando bibliotecas de cadena simple. Los oligonucleótidos eluídos fueron amplificados por PCR utilizando uno de los primers marcado con biotina. Los Obs obtenidos contra los diferentes péptidos fueron probados en su habilidad para reconocer las proteínas PrPC y rPrP bovina usando una mezcla de proteínas totales en Western blots. Como resultado se obtuvieron Obs policlonales capaces de reconocer rPrP (50 ng) en Western blots, pero con baja afinidad y especificidad. Los métodos y estrategias para producir estos reactivos no resultaron adecuados para PrP. Se están diseñando nuevas estrategias para aumentar tanto la especificidad como la afinidad de estos reactivos. Agradecimientos: Beca del CONICET a A.G. Valdivieso.